[发明专利]一种角膜基质、制备方法与应用

摘要

本发明提供一种角膜基质、制备方法与应用，采用动物的眼角膜为原料，去除角膜上皮层、角膜基质中的细胞成分和DNA成分，保留前弹力层和部分厚度角膜基质，保留完整的细胞外基质成分；该角膜基质适用于病变角膜的覆盖，尤其适用于用药无效的尚未穿孔角膜溃疡、需要板层移植治疗的感染性角膜炎患者，以及角膜穿孔的临时性覆盖。

主权项

1.一种角膜基质，其特征在于：采用动物的眼角膜为原料，去除角膜上皮层、角膜基质中的细胞成分和DNA成分，保留前弹力层和部分厚度角膜基质，保留完整的细胞外基质成分；所述角膜基质通过以下步骤制备：/n(1)原料处理：取动物的眼球，取角膜、清洗后浸泡于纯化水中；/n(2)冻融溶胀：角膜先用水浸泡，再冷冻；冷冻后取出、待完全解冻后用纯化水冲洗，然后再浸泡；重复上述冷冻、解冻过程多次，得到吸水膨胀的角膜；/n(3)病毒灭活：采用过氧乙酸-乙醇溶液浸泡角膜进行病毒灭活；/n(4)清洗过程：分别用PBS溶液和纯化水在超声装置中处理角膜；其中，PBS溶液pH6-8、溶液温度为10-40℃，PBS溶液与角膜的体积比为(30-60)︰1，清洗2-4次，每次10-30min；然后采用10-40℃的注射用水清洗，注射用水与角膜体积比为(30-60)︰1，至检测电导率为10μs/cm以下终止；/n(5)免疫原去除：免疫原去除液为PBS溶液，所述PBS溶液中包含胰蛋白酶和EDTA，角膜的免疫原去除过程在多频超声装置中进行；其中，免疫原去除液中胰蛋白酶质量百分比浓度为0.01-0.2％，EDTA的浓度0.1-1mmol/L，免疫原去除液的pH值为7-8；多频超声装置提供至少包括两个超声频率，低频频率范围为20-40KHz，高频频率为60-90KHz，其中低频处理5-40min，高频处理5-40min，温度范围为20-35℃；/n(6)清洗过程：分别用PBS溶液和纯化水在超声装置中处理角膜；/n(7)重复步骤(5)和(6)多次，然后将角膜浸泡在纯化水中；/n(8)切削取材：在解剖镜下使用角膜板层刀，切取角膜前弹力层和部分基质、然后将其浸泡于纯化水中；/n(9)烘干干燥：将角膜平展在支撑件表面，放置在烘箱中进行干燥获得角膜基质。/n