[发明专利]提取原油总脱氧核糖核酸的方法及试剂盒

摘要

本发明涉及提取原油总脱氧核糖核酸的方法及试剂盒，所述方法包括对原油预处理；阳‑阴表活剂法裂解活细胞和/或死细胞得含总脱氧核糖核酸的上清液；利用氯仿‑醇沉淀、苯酚/氯仿‑醇沉淀、氯仿‑纯化柱及苯酚/氯仿‑纯化柱4种纯化方法之一提取得到总脱氧核糖核酸。本发明针对原油自身性质和成分复杂的特点，开发了4种适用范围广的提取原油中总脱氧核糖核酸的方法和试剂盒，可有效提取原油总脱氧核糖核酸。

主权项

1.提取原油总脱氧核糖核酸的方法，所述方法包括如下步骤：(1)对原油预处理；当所述原油为轻质原油时，采用异辛烷或三羟甲基氨基甲烷‑乙二胺四乙酸缓冲液进行预处理；当所述原油为中质原油、重质原油或特重质原油时，采用异辛烷进行预处理；所述的预处理包括在原油中加入等体积异辛烷或TE缓冲液，再加入玻璃珠，涡旋，充分研磨成匀浆，装入离心管后离心，弃去上清液，保留离心管底部的沉淀；(2)采用阳‑阴表活剂法裂解经预处理后的原油中的活细胞和/或死细胞，得含总脱氧核糖核酸的上清液；其中，阳‑阴表活剂法裂解活细胞和/或死细胞包括如下步骤：在步骤(1)预处理后的样品中加入质量体积比1g:20～40μL的浓度为10～20mg/mL溶菌酶，振荡，加入质量体积比为1g:2～4mL的浓度为5～20mg/mL的含十六烷基三甲基溴化铵的DNA提取缓冲液，及质量体积比为1g:20～40μL的浓度为5～20mg/mL朊酶k，振荡，再加入质量体积比为1g:0.2～0.4mL的浓度为100～200mg/mL的十二烷基硫酸钠溶液，样品加热至50～65℃维持1h～2h，冷却至20～25℃后离心收集上清液；所述质量体积比均是相对于所述预处理后的样品；(3)利用氯仿‑醇沉淀、苯酚/氯仿‑醇沉淀、氯仿‑纯化柱及苯酚/氯仿‑纯化柱4种纯化方法之一从所述上清液中提取得到总脱氧核糖核酸。