[发明专利]一种诺如病毒溯源方法及其引物、试剂盒、应用有效
| 申请号： | 201710113551.2 | 申请日： | 2017-02-28 |
| 公开（公告）号： | CN106987655B | 公开（公告）日： | 2020-05-08 |
| 发明（设计）人： | 杨向莹;张捷;张文玲;李小林;王琳;畅晓晖;万晓楠;陈广全 | 申请（专利权）人： | 北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京三聚阳光知识产权代理有限公司 11250 | 代理人： | 李敏 |
| 地址： | 100026*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种诺如病毒溯源方法及其引物、试剂盒、应用，包括如下步骤：(1)富集诺如病毒并提取所述诺如病毒的基因组RNA，反转录为cDNA,备用；(2)取步骤(1)获得的基因组cDNA为模板，设计如下引物，对所述基因组DNA进行PCR扩增；(3)将步骤(2)获得的PCR扩增产物进行变性梯度凝胶电泳处理，分析所得的凝胶图谱，然后回收凝胶条带，以所述条带的回收产物为模板，设计以下引物，进行PCR扩增；(4)将步骤(3)获得的PCR扩增产物切胶回收、纯化，将PCR产物进行克隆测序，然后登陆Genbank进行测序比对，得到所述诺如病毒的基因类型。所述的方法测定结果准确、稳定可靠，灵敏度高以及检测费用低。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 病毒 溯源 方法 及其 引物 试剂盒 应用 | ||
【主权项】：
一种基于PCR‑DGGE的诺如病毒溯源方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)富集诺如病毒并提取所述诺如病毒的基因组RNA，以获得所述基因组RNA为mRNA进行反转录得到cDNA，备用；(2)取步骤(1)获得的基因组cDNA为模板，以如下引物，对所述基因组DNA进行PCR扩增；上游引物F：5‘‑ATGTTCMGMTGGATGMGATTC‑3’；下游引物GC‑R：5‘‑CGCCCGGGGCGCGCCCCGGGGCGGGGCGGGGGCGCGGGGGGTMGACGCCATCWTCATTYAC‑3’；(3)将步骤(2)获得的PCR扩增产物进行变性梯度凝胶电泳处理，分析所得的凝胶图谱，然后回收凝胶条带，以所述条带的回收产物为模板，以如下引物，进行PCR扩增；上游引物F：5‘‑ATGTTCMGMTGGATGMGATTC‑3’；下游引物R：5‘‑TMGACGCCATCWTCATTYAC‑3’；(4)将步骤(3)获得的PCR扩增产物进行电泳，然后切胶回收、纯化，将所得PCR扩增产物进行克隆测序，然后登陆Genbank进行测序比对，得到所述诺如病毒的基因类型。
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