[发明专利]乙型肝炎e抗原阴性小鼠模型的构建方法在审
| 申请号： | 201710101368.0 | 申请日： | 2017-02-24 |
| 公开（公告）号： | CN106868045A | 公开（公告）日： | 2017-06-20 |
| 发明（设计）人： | 赖国旗;张华堂;赵中华;王蕾;曹敏;魏青绿;向钦;唐雨微 | 申请（专利权）人： | 重庆市科学技术研究院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 重庆市前沿专利事务所(普通合伙)50211 | 代理人： | 邹晓艳 |
| 地址： | 401123 重庆*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种乙型肝炎e抗原阴性小鼠模型的构建方法，包括步骤1)提取被诊断为HBeAg阴性感染的病人血清DNA，使用引物对HBV‑F/HBV‑R进行PCR扩增；2)PCR产物测序，重新设计针对该序列的特异性PCR扩增引物对重新进行PCR扩增；3)将PCR产物克隆到pEASY‑Blunt Zero载体中；4)提取质粒，酶切，回收片段并纯化，环化并纯化，得到HBV e阴性的cccDNA；5)将cccDNA注射入小鼠中，即构建了乙型肝炎e抗原阴性小鼠模型。本发明首次成功的构建了乙型肝炎e抗原阴性小鼠模型，对HBeAg阴性乙肝感染的机理研究和药物处理疗效研究具有重要意义。 | ||
| 搜索关键词： | 乙型肝炎 抗原 阴性 小鼠 模型 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种乙型肝炎e抗原阴性小鼠模型的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：1)提取被诊断为HBeAg阴性感染的病人血清DNA，使用引物对HBV‑F/HBV‑R进行PCR扩增，引物序列为：HBV‑F：5′‑CCGGAAAGCTTATGCTCTTCTTTTTCACCTCTGCCTARTCATC‑3′，HBV‑R：5′‑CCGGAGAGCTCATGCTCTTCAAAAAGTTGCATGGTGCTGGTG‑3′；2)将PCR产物进行测序，根据测序结果重新设计针对该序列的特异性PCR扩增引物对，利用该引物对HBeAg阴性感染的病人血清DNA重新进行PCR扩增；3)将步骤2)获得的PCR产物克隆到pEASY‑HBV载体中，挑选阳性克隆；4)提取步骤3)中阳性克隆的质粒，将提取到的质粒用BspQI内切酶酶切，回收大小约3.2kb的的片段并纯化，用T4连接酶将其环化并纯化，得到HBeAg阴性的cccDNA；5)将步骤4)得到的cccDNA注射入小鼠中，即构建了乙型肝炎e抗原阴性小鼠模型。
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