[发明专利]乙型肝炎e抗原阴性小鼠模型的构建方法

权利要求书

1.一种乙型肝炎e抗原阴性小鼠模型的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)提取被诊断为HBeAg阴性感染的病人血清DNA，使用引物对HBV-F/HBV-R进行PCR扩增，引物序列为：

HBV-F：5′-CCGGAAAGCTTATGCTCTTCTTTTTCACCTCTGCCTARTCATC-3′，HBV-R：

5′-CCGGAGAGCTCATGCTCTTCAAAAAGTTGCATGGTGCTGGTG-3′；

2)将PCR产物进行测序，根据测序结果重新设计针对该序列的特异性PCR扩增引物对，利用该引物对HBeAg阴性感染的病人血清DNA重新进行PCR扩增；

3)将步骤2)获得的PCR产物克隆到pEASY-HBV载体中，挑选阳性克隆；

4)提取步骤3)中阳性克隆的质粒，将提取到的质粒用BspQI内切酶酶切，回收大小约3.2kb的的片段并纯化，用T4连接酶将其环化并纯化，得到HBeAg阴性的cccDNA；

5)将步骤4)得到的cccDNA注射入小鼠中，即构建了乙型肝炎e抗原阴性小鼠模型。

2.如权利要求1所述的乙型肝炎e抗原阴性小鼠模型的构建方法，其特征在于：步骤2)中所述的引物对为HBV-VF/HBV-VR，序列为：

HBV-VF：CCGGATGCTCTTCTTTTTCACCTCTGCCTAATCATC，

HBV-VR：CCGGATGCTCTTCAAAAAGTTGCATGGTGCTGGTG。

3.如权利要求1所述的乙型肝炎e抗原阴性小鼠模型的构建方法，其特征在于：步骤5)中采用水动力法将cccDNA注射入小鼠中。

4.如权利要求3所述的乙型肝炎e抗原阴性小鼠模型的构建方法，其特征在于：在步骤5)中，每只小鼠注射2μg cccDNA，cccDNA的浓度为1μg/mL，注射时间为5～8s。