[发明专利]一种胎盘间充质干细胞的分离及培养方法

摘要

本发明公开了一种胎盘间充质干细胞的分离及培养方法，属于间充质干细胞领域，所述分离及培养方法按如下步骤实施原代组织剥取步骤、组织块消化步骤、接种处理步骤、原代细胞培养及收获步骤以及原代细胞传代步骤。本发明公开的胎盘间充质干细胞的分离及培养方法，其采用组织块法对胶体进行分离，能够获得数量可观的原代细胞，适合大规模工业化生产，胎盘间充质干细胞原代培养符合标准要求，能有效保证续代的遗传稳定性，为临床医学种子细胞的应用提供了良好的基础。

主权项

一种胎盘间充质干细胞的分离及培养方法，其特征在于，按如下步骤实施：SOO:原代组织剥取步骤：用酒精擦拭胎盘容器的外壁，从所述胎盘容器中取出胎盘组织，将所述胎盘组织置于无菌盘内，用生理盐水冲洗胎盘组织；从所述胎盘组织中分离出羊膜组织、绒毛膜组织以及蜕膜组织，并将所述羊膜组织、所述绒毛膜组织以及所述蜕膜组织置于不同的培养皿内；对所述羊膜组织、所述绒毛膜组织以及所述蜕膜组织进行洗涤及去杂质处理；将所述羊膜组织、所述绒毛膜组织以及所述蜕膜组织装入不同的离心管内，剪碎成为羊膜组织块、绒毛膜组织块以及蜕膜组织块；S10：组织块消化步骤：在装有所述羊膜组织块的离心管、所述绒毛膜组织块的离心管以及所述蜕膜组织块的离心管中分别加入胶原酶II进行充分混合，将所述羊膜组织块、所述绒毛膜组织块以及所述蜕膜组织块分别置于不同的恒温振荡器进行消化反应；消化反应完成后，加入适量生理盐水充分混合，对所述羊膜组织块、所述绒毛膜组织块以及所述蜕膜组织块以及各个组织块产生的细胞悬液进行过滤；将所述羊膜组织块、所述绒毛膜组织块以及所述蜕膜组织块以及各个组织块产生的细胞悬液分别定容至不同的离心管中进行离心处理；S20：接种处理步骤：去除上述不同所述离心管内的上清液后，在各个不同所述离心管内加入培养基，吹打后将不同所述离心管中的内容物转入不同培养瓶进行接种培养；S30：原代细胞培养及收获步骤：将装有所述羊膜组织、所述绒毛膜组织以及所述蜕膜组织的组织块及细胞悬液的所述培养瓶置于培养箱内进行培养；原代培养预设时间后，对上述不同所述培养瓶分别进行换液处理；当不同所述培养瓶内部的原代培养的细胞克隆团的面积百分比与预设面积百分比一致时，对不同所述培养瓶内部的细胞克隆团进行消化处理，并收获P0细胞；S40：原代细胞传代步骤：将用于传代的所述P0细胞置于离心管内进行离心处理，离心后取出上清液，并加入适当培养基，轻轻吹打重悬浮细胞，并对离心管内的悬浮细胞进行取样计数；将用于传代的所述P0细胞装入至培养瓶内，并置于培养箱内进行传代培养。当所述培养瓶内的细胞融合度与预设细胞融合度一致时，可以选择依据上述步骤继续传代处理或者对所述培养瓶内的细胞进行冻存。