[发明专利]一种中华鳖肺巨噬细胞的原代培养方法

摘要

本发明公开了一种中华鳖肺巨噬细胞的原代培养方法，包括中华鳖完整肺巨噬细胞的分离及肺巨噬细胞的原代培养两大步骤。本发明操作简单，培养方便，培养成功率高，特别是冲洗离体肺组织，使得肺组织原代细胞分离培养容易方便，为中华鳖病毒研究提供有效的细胞介质。

主权项

一种中华鳖肺巨噬细胞的原代培养方法，其特征在于，包括以下步骤：一、中华鳖完整肺巨噬细胞的分离：(1)取100‑500g重的中华鳖，体表消毒，采用断颈法处死，解剖取出完整肺部组织；(2)肺部组织置于预冷的加双抗的PBS液中，去除多余的其它组织，洗涤3次，然后放入预冷的HBSS平衡盐溶液中；(3)采用含有3％胎牛血清的M199液体培养基为洗涤液注入肺部，冲洗两次，合并两次所得的冲洗液；(4)冲洗液过100μm滤网，一次离心，去上清，沉淀加红细胞裂解液裂解红细胞5‑8min，100μm滤网过滤，二次离心，二次离心所得细胞沉淀待用；二、肺巨噬细胞的原代培养：二次离心所得细胞沉淀用细胞培养液重悬，按1×106～5×106个/ml细胞分装至细胞培养瓶培养，28～30℃，5％CO2条件下培养。