[发明专利]一种双基因干扰提高里氏木霉纤维素酶酶活的方法有效
| 申请号： | 201710045616.4 | 申请日： | 2017-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN106636172B | 公开（公告）日： | 2019-11-08 |
| 发明（设计）人： | 薛栋升;曾徐浩 | 申请（专利权）人： | 湖北工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12N15/56;C12N1/15;C12R1/885 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 常海涛 |
| 地址： | 430068 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种双基因干扰提高里氏木霉纤维素酶酶活的方法，属于基因工程技术领域。本发明方法为通过RNAi降低里氏木霉木聚糖酶基因、纤维素内切酶基因的表达，具体包括如下步骤：将两端有限制性内切酶识别位点且含有SEQ ID NO.1所示序列的干扰片段通过相应限制性内切酶和DNA连接酶构建到pSilent‑1上；将所构建的重组载体转化到里氏木霉中，转化有重组载体的里氏木霉纤维素酶酶活得到提高。本发明通过RNAi干扰序列的合理设计，不仅显著降低木聚糖酶的表达，还适度降低纤维素内切酶的表达、增强葡糖苷酶的表达，优化了纤维素酶酶系中三种酶的活性比例，提高了里氏木霉纤维素酶酶活。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基因 干扰 提高 里氏 纤维素酶 方法 | ||
【主权项】：
1.一种双基因干扰提高里氏木霉纤维素酶酶活的方法，其特征在于：所述的方法为通过RNAi降低里氏木霉木聚糖酶基因、纤维素内切酶基因的表达，提高里氏木霉纤维素酶酶活；包括如下步骤：（1）将两端有限制性内切酶识别位点且含有SEQ ID NO.1所示序列的干扰片段通过相应限制性内切酶和DNA连接酶构建到pSilent‑1上；（2）将步骤（1）构建的重组载体转化到里氏木霉中，转化有重组载体的里氏木霉纤维素酶酶活得到提高；所述的里氏木霉为里氏木霉ATCC24449。
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