[发明专利]犬科动物间充质干细胞库及其构建方法

摘要

本发明公开了一种犬科动物间充质干细胞库及其构建方法和设备，本发明的构建方法步骤包括(1)胎盘、脐带采集及检测；(2)胎盘、脐带组织的酶消化；(3)使用特别设计的带有多级目筛的细胞过滤器收集细胞；(4)多次消化过滤收集得到粒径10‑25um左右的细胞；(5)培养细胞并进行鉴定；(6)液氮冷冻检定合格的间充质干细胞，保存、建立细胞信息档案，即构建出犬胎盘、脐带间充质干细胞库。所述方法获得的间充质干细胞活性高，可长期保存，操作简便。所述间充质干细胞库应用于种属关系相近犬类的相关疾病治疗。

主权项

一种犬科动物间充质干细胞库的构建方法，包括：(1)筛选供者犬，从成年健康孕犬中选择体格检查合格的对象；(2)取犬科动物胎盘、脐带，抽取胎盘血进行传染病检测，检测合格后，冲洗去除残留血液并浸泡胎盘脐带组织；(3)将胎盘脐带组织进行粗剪，再次用磷酸缓冲液清洗，去除残留血液；(4)将组织放入含有I型胶原酶和胰酶的混合溶液的容器中进行消化；(5)对步骤(4)消化所得混合物进行过滤，得到间充质干细胞悬液；(6)重复步骤(4)‑(5)，直到收集足够间充质干细胞悬液，离心收集沉淀、重悬、接种培养传代；(7)对细胞进行形态、表型和分化鉴定；(8)将检定合格的间充质干细胞置液氮冷冻，按其种属进行保存，建立可供检索的细胞信息档案，即构建出犬科动物间充质干细胞库。