[发明专利]一种构建FFPE样本DNA文库的方法在审

专利信息
申请号: 201611222985.8 申请日: 2016-12-27
公开(公告)号: CN108251515A 公开(公告)日: 2018-07-06
发明(设计)人: 刘伟;王秀莉;董超;玄兆伶;李大为;梁峻彬;陈重建 申请(专利权)人: 安诺优达基因科技(北京)有限公司;浙江安诺优达生物科技有限公司;安诺优达(义乌)医学检验有限公司
主分类号: C12Q1/6869 分类号: C12Q1/6869;C40B50/06;C40B40/06
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 100176 北京市北京经济技*** 国省代码: 北京;11
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摘要: 发明涉及一种构建FFPE样本DNA文库的方法,总体而言,本发明对FFPE样本DNA文库的构建方法做了改进,对低质量FFPE样本DNA进行末端修复,纯化;3'端加A;加接头,纯化以及PCR扩增,纯化。其中,加接头反应结束后,使用0.9×磁珠进行纯化。本发明通过对建库步骤的优化,降低了DNA片段的损失,即使采用低质量FFPE样本DNA构建文库仍然能够获得足够高通量测序使用的文库产量,使对低质量FFPE样本的研究成为可能。
搜索关键词: 样本DNA 文库 构建 高通量测序 末端修复 磁珠 建库 样本 优化 改进 研究
【主权项】:
1.一种构建FFPE样本DNA文库的方法,其包括:步骤A:提取FFPE样本的DNA,得到样本基因组DNA片段;步骤B:将样本基因组DNA片段进行末端修复,纯化得到平末端DNA片段;步骤C:将平末端DNA片段进行3'端加A,得到3'端加A的DNA片段;步骤D:将加3'端加A的DNA片段进行加接头,纯化得到加接头DNA片段;步骤E:将加接头DNA片段进行PCR扩增,纯化得到DNA片段文库,其中,步骤D中的纯化采用0.9×磁珠纯化。
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