[发明专利]一种用于检测动物胶中驴皮源成分含量的组合物、试剂盒及其检测方法

摘要

本发明公开了一种用于检测动物胶中驴皮源成分含量的组合物、试剂盒及其检测方法，所述组合物由多肽I、多肽II、多肽III以及对照品检测基质组成。所述多肽I的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示，多肽II的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示，多肽III的氨基酸序列为SEQ ID NO.3所示，对照品检测基质为鱼皮胶。通过多肽I的检测值减去多肽II的检测值，并利用多肽III的检测值来修正检测偏差，从而实现对动物胶中驴皮源成分的含量检测。该方法具有含量检测准确、操作简单的优点，在动物胶产品质量监控领域将具有广泛的应用前景。

主权项

1.一种用于检测动物胶中驴皮源成分含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)对照品溶液的制备/n1)基质溶液的制备：将称量好的对照品检测基质置于量瓶中，加入NH₄HCO₃溶液，超声使样品完全溶解，加NH₄HCO₃溶液稀释至刻度；/n2)对照品母液的制备：将称量好的对照品检测基质置于量瓶中，加入NH₄HCO₃溶液，超声使样品完全溶解，将称量好的的多肽I、多肽II和多肽III放入该量瓶中，用NH₄HCO₃溶液溶解并稀释至刻度；/n所述多肽I的氨基酸序列为Gly-Ala-Thr-Gly-Pro-Ala-Gly-Val-Arg，多肽II的氨基酸序列为/nGly-Ile-Hyp-Gly-Pro-Val-Gly-Ala-Ala-Gly-Ala-Thr-Gly-Ala-Arg，多肽III的氨基酸序列为Gly-Val-Val-Gly-Leu-Pro-Gly-Gln-Arg，对照品检测基质为鱼皮胶；/n3)对照品溶液制备：以步骤1)制得的基质溶液为溶剂，将步骤2)制得的对照品母液稀释，微孔滤膜过滤，续滤液中加胰蛋白酶溶液，酶解；/n(2)待测动物胶溶液的制备/n将称量好的待测动物胶置于量瓶中，加NH₄HCO₃溶液，超声使动物胶完全溶解，加NH₄HCO₃溶液稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，续滤液中加胰蛋白酶溶液，酶解；/n(3)液质联用仪检测/n将步骤(1)制得的对照品溶液、步骤(2)制得的待检测动物胶溶液分别放入液质联用仪，选择m/z393.4→499.3、643.3，m/z634.7→830.4、927.5，m/z442.0→726.4、570.3作为检测离子对进行MRM扫描，其中，m/z393.4→499.3，m/z634.7→830.4，m/z442.0→726.4分别作为多肽I、多肽II和多肽III的定量离子对进行定量检测；/n(4)动物胶中驴皮源成分含量的计算/n以对照品溶液的各多肽的含量为纵坐标、峰面积为横坐标进行标准曲线的绘制，由此计算出动物胶中多肽I、多肽II和多肽III的含量，从而计算出动物胶中驴皮源成分的含量，待检测动物胶中多肽I的含量记为M1、多肽II的含量记为M2、多肽III的含量记为M3，按下式计算出动物胶中驴皮源成分的含量：/n驴皮源成分的含量(％)＝(M1/392.4–M2/633.7)×880/M3×100％。/n