[发明专利]一种用于检测动物胶中驴皮源成分含量的组合物、试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种用于检测动物胶中驴皮源成分含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)对照品溶液的制备

1)基质溶液的制备：将称量好的对照品检测基质置于量瓶中，加入NH₄HCO₃溶液，超声使样品完全溶解，加NH₄HCO₃溶液稀释至刻度；

2)对照品母液的制备：将称量好的对照品检测基质置于量瓶中，加入NH₄HCO₃溶液，超声使样品完全溶解，将称量好的的多肽I、多肽II和多肽III放入该量瓶中，用NH₄HCO₃溶液溶解并稀释至刻度；

所述多肽I的氨基酸序列为Gly-Ala-Thr-Gly-Pro-Ala-Gly-Val-Arg，多肽II的氨基酸序列为

Gly-Ile-Hyp-Gly-Pro-Val-Gly-Ala-Ala-Gly-Ala-Thr-Gly-Ala-Arg，多肽III的氨基酸序列为Gly-Val-Val-Gly-Leu-Pro-Gly-Gln-Arg，对照品检测基质为鱼皮胶；

3)对照品溶液制备：以步骤1)制得的基质溶液为溶剂，将步骤2)制得的对照品母液稀释，微孔滤膜过滤，续滤液中加胰蛋白酶溶液，酶解；

(2)待测动物胶溶液的制备

将称量好的待测动物胶置于量瓶中，加NH₄HCO₃溶液，超声使动物胶完全溶解，加NH₄HCO₃溶液稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，续滤液中加胰蛋白酶溶液，酶解；

(3)液质联用仪检测

将步骤(1)制得的对照品溶液、步骤(2)制得的待检测动物胶溶液分别放入液质联用仪，选择m/z393.4→499.3、643.3，m/z634.7→830.4、927.5，m/z442.0→726.4、570.3作为检测离子对进行MRM扫描，其中，m/z393.4→499.3，m/z634.7→830.4，m/z442.0→726.4分别作为多肽I、多肽II和多肽III的定量离子对进行定量检测；

(4)动物胶中驴皮源成分含量的计算

以对照品溶液的各多肽的含量为纵坐标、峰面积为横坐标进行标准曲线的绘制，由此计算出动物胶中多肽I、多肽II和多肽III的含量，从而计算出动物胶中驴皮源成分的含量，待检测动物胶中多肽I的含量记为M1、多肽II的含量记为M2、多肽III的含量记为M3，按下式计算出动物胶中驴皮源成分的含量：

驴皮源成分的含量(％)＝(M1/392.4–M2/633.7)×880/M3×100％。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)及步骤(2)所述的酶解温度为37℃。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中液质联用仪检测的液相条件为：C₁₈反相色谱柱，流动相A为0.1％v/v甲酸的水溶液，流动相B为0.1％v/v甲酸的乙腈溶液，流速0.3ml/min；梯度洗脱：0→40min，流动相A 100％→50％，流动相B 0％→50％，质谱条件：电喷雾正离子模式(ESI⁺)进行多反应监测。