[发明专利]DNA片断与载体快速连接转化的新方法及其应用

摘要

本发明涉及一种基因克隆技术，即对传统的分子克隆技术进行了改良，具体地说是运用PCR扩增技术替代常规的连接酶反应步骤，将待克隆的DNA片断与载体快速连接并直接转化到大肠杆菌感受态细胞的实验方法。与传统方法相比，该技术不受限制性内切酶酶切位点限制，根据DNA片段和载体末端序列设计接头引物，利用PCR反应可将任何DNA片段与载体连接起来，实现分子克隆的目的。该方法作为一种通用方法,不仅缩短了分子克隆反应时间，提高了克隆转化效率，而且适用于不同长度基因与载体的连接及转化，具有广泛的应用价值。

主权项

1.一种用于分子生物学中基因克隆的实验方法，该方法包括如下内容：(1)设计接头引物：根据线性载体及待克隆的DNA片断两端序列，设计连接线性载体与DNA片断的接头引物，包含带有载体3'末端序列与DNA 5'末端序列的F adaptor引物，以及带有载体5'末端序列与DNA3'末端序列的R adaptor引物；(2)连接反应：不用DNA连接酶，将线性载体、DNA片断及接头引物按照所需比例混合，通过PCR扩增反应，将DNA片段与线性载体连接起来；PCR产物中含有DNA和载体的连接产物；(3)转化：将上述PCR反应液，直接添加到大肠杆菌感受态细胞中进行热转化；(4)筛选：采用PCR方法或蓝白菌落方法筛选阳性克隆。