[发明专利]DNA扩增产物快速检测方法

摘要

本发明公开了一种DNA扩增产物快速检测方法，通过在目的DNA上下游引物的5’端分别添加不同的Tag序列，并使用带有两个羟甲基的芳香族化合物对引物与Tag之间的区段进行修饰，使其PCR扩增产物带有末端单链标签Tag。分别设计与上下游引物Tag互补的序列，并将该互补序列分别结合到胶体金粒子上，制成标记胶体金溶液。将PCR扩增产物与标记胶体金溶液混合，通过肉眼便可判断检测结果，无需其他仪器设备，大大节约检测成本，且具有很高的检测灵敏度和广泛的通用性。

主权项

1.一种用于非疾病诊断目的的DNA扩增产物快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）设计用于扩增目的DNA的上游引物F和下游引物R序列，并在上游引物F和下游引物R序列的5’端分别加上Tag1和Tag2序列，上游引物F序列和Tag1序列之间、下游引物R序列和Tag2序列之间分别用带有两个羟甲基的芳香族化合物隔开，得到F‑Tag1和R‑Tag2，两个羟甲基分别与相邻两个核苷酸的磷酸基形成磷酸二酯键；所述带有两个羟甲基的芳香族化合物为以下结构式化合物中的一种：；（2）分别设计与Tag1和Tag2互补的序列C‑Tag1和C‑Tag2，并分别在C‑Tag1和C‑Tag2的5’端用‑SH修饰；将修饰过后的C‑Tag1和C‑Tag2分别通过金硫键结合到胶体金粒子上，得到AuNP DNA1和AuNP DNA2；将AuNP DNA1和AuNP DNA2按C‑Tag1和C‑Tag2摩尔比1:1混匀制备成红色透明的标记胶体金溶液，备用；（3）以待检测DNA为模板、F‑Tag1和R‑Tag2为扩增引物，混合PCR反应体系置于PCR仪中进行反应，得到PCR产物；（4）将PCR产物加入到标记胶体金溶液中混匀，肉眼观察进行检测及判断，标记胶体金溶液无变化则检测结果为阴性，标记胶体金溶液变浑浊则检测结果为阳性。