[发明专利]一种遗传标记在紫杏鉴定中的应用

摘要

本发明属于植物遗传标记制备与应用技术领域。具体涉及一种遗传标记在紫杏鉴定中的应用，本发明利用DNA条形码基因序列，建立PCR扩增方法和采用0.5％的琼脂糖凝胶电泳图谱直接检测紫杏(P.dasycarpa Ehrh.)的特征条带，若在一个泳道上同时出现2条分子量大小约750bp和720bp片段则能够判断是紫杏，若仅仅有一条720bp的片段判定为普通栽培杏。本发明可快速、精准地对紫杏和其他栽培杏进行分子鉴定，本发明简化了鉴定程序，降低了鉴定成本。

主权项

如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO:3所示序列的遗传标记在紫杏鉴定中的应用，其特征在于，所述的应用包括下列步骤(1)从待测杏属材料中提取基因组DNA；(2)以登陆号为KX890450与登陆号KX890452和登陆号为KX890451与KX890449两条ITS序列作为模板设计引物，进行PCR扩增：所述引物的序列如下所述：ITS‑5：GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG‑3，ITS‑4：TCCTCCGCTTATTGATATGC；(3)按照如下反应体系进行：在50μL体系中含有1×Buffer，1.5mmol/L Mg2+，0.20mmol/L dNTPs，引物各0.20mmol/L，Taq DNA聚合酶1U，0.1mg/mL BSA，4％DMSO，30‑50ng模板DNA；(4)按照如下程序扩增：96℃预变性5min，96℃变性30s，50℃退火45s，72℃延伸1min，循环30次，最后72℃延伸至7min；(5)将所得的PCR产物用0.5％琼脂糖电泳进行检测，按照如下步骤进行：待凝胶完全凝固，小心拔去梳子；将电泳样品依次加入点样孔中；将制胶板放入电泳槽中，使电泳缓冲液淹没过凝胶1mm，打开电泳仪，使核酸样品由负极向正极泳动，电泳时间为35min；电泳完成后切断电源，取出凝胶，放入凝胶成像系统中观察电泳结果，并照相记录；对跑胶带进行研判，若在一个泳道上同时出现2条分子量大小为750bp和720bp片段鉴定为紫杏，若仅仅有一条720bp的片段鉴定为其他类型的杏。