[发明专利]一种山葡萄愈伤组织培养基及其应用

摘要

本发明提供了一种山葡萄愈伤组织培养基，以MS培养基为基础添加蔗糖、琼脂、6‑苄氨基腺嘌呤和生长素类似物；生长素类似物选自萘乙酸、吲哚丁酸和2,4‑二氯苯氧乙酸中的一种。本发明还提供了使用该培养基进行耐盐山葡萄愈伤组织的诱导培养方法：将山葡萄的展叶新梢的叶片剪裁后作为外植体接种至诱导培养基上，后将诱导出的愈伤组织转移到继代培养基，后取继代愈伤组织，切成小块后接种至耐盐继代培养基，后取新生长出的愈伤组织，切成小块后接种至新的耐盐继代培养基，重复3‑4次得到耐盐愈伤组织，将其接种至扩增培养基。HPLC测定结果表明耐盐愈伤组织白藜芦醇含量为1580μg/g显著高于对照的505μg/g，约为对照的3倍。

主权项

1.一种耐盐高白芦藜醇山葡萄愈伤组织的诱导培养方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)将山葡萄的展叶新梢剪成小段，清洗并消毒；2)将所述小段的叶片剪裁至适合培养的大小后作为外植体接种至诱导培养基上；3)25‑30天后，将诱导出的愈伤组织转移到继代培养基上进行培养；4)25‑30天后，取继代愈伤组织，切割成小块后接种至耐盐继代培养基上；5)18‑23天后，取新生长出的愈伤组织，切割成小块后接种至新的耐盐继代培养基上继续培养；6)重复步骤5)3‑4次后，得到耐盐愈伤组织，将所述耐盐愈伤组织接种至扩增培养基上培养；其中，所述诱导培养基、所述继代培养基和所述扩增培养基均为山葡萄愈伤组织培养基，所述山葡萄愈伤组织培养基以MS培养基为基础，添加蔗糖、琼脂、6‑苄氨基腺嘌呤和生长素类似物；其中，所述生长素类似物选自萘乙酸、吲哚丁酸和2,4‑二氯苯氧乙酸中的任意一种，所述培养基中各添加物的加入量如下：蔗糖25‑35g/L；琼脂4‑8g/L；6‑苄氨基腺嘌呤1.5‑2.5mg/L；生长素类似物0.05‑0.2g/L；所述耐盐继代培养基为所述山葡萄愈伤组织培养基中添加了按质量百分比计1‑1.5％的无机盐。