[发明专利]一种高效薄层色谱和可调节的表面增强拉曼光谱联用快速检测奶制品中多种生物胺的方法

摘要

一种高效薄层色谱和可调节的表面增强拉曼光谱联用快速检测奶制品中多种生物胺的方法，属于食品检测技术领域。本发明包括纳米银胶的制备、样品的制备、高效薄层色谱分离和HPTLC‑SERS检测等步骤。本发明建立了一种识别多种生物胺（酪胺、腐胺和尸胺）结构的HPTLC‑SERS检测方法，具有经济、快速、简便的优点；同时新型增效剂的选择性增强功能拓宽了HPTLC‑SERS检测的适用范围，为直接快速检测化学衍生化的色谱板开辟了新的视野。

主权项

一种高效薄层色谱和可调节的表面增强拉曼光谱联用快速检测奶制品中多种生物胺的方法，其特征在于具体步骤如下：（1）纳米银胶的制备：取5mL的市售纳米银颗粒悬浮液以4000r/min离心10min后，弃去4.5mL上清液，将剩余0.5mL液体置于混匀器上充分振荡1min，使其重新悬浮，得到10倍浓缩的纳米银胶体；（2）样品的制备：a、生物胺的标准溶液的制备：用甲醇为溶剂制备浓度为0.05mg/mL样品；所述制备的生物胺的标准溶液为酪胺、尸胺及腐胺的标准溶液；b、奶酪/酸奶样品中生物胺的提取：称取10g奶制品，加入10mL质量浓度为10%的三氯乙酸水溶液，用匀浆器混成匀浆；在匀浆中加入0.1mL 0.25g/mL NaOH溶液充分振荡混匀，置于3000r/min的离心机上离心5min，取2mL上清液，用0.45μm纤维膜过滤后使用；（3）高效薄层色谱分离：将每样各2‑4μL步骤（2）制备的生物胺的标准溶液及奶酪/酸奶样品提取物用薄层色谱点样仪进行精确点样，点样完成后用展开液展开，上行展开50mm取出硅胶板；用0.1mg/mL的荧光胺的丙酮溶液浸渍衍生，取下硅胶板在80℃平板加热器上加热3min，置于366nm紫外灯的照射下获取硅胶板的图像；所述展开液配置按体积比计为：甲醇︰丙酮︰质量浓度为25%的氨水=3︰7︰0.5；（4）HPTLC‑SERS检测：将经过步骤（3）高效薄层色谱分离后所得硅胶板在366nm紫外光的照射下用铅笔标记出可见的荧光条带；在标记区域，用毛细移液管依次滴加步骤（1）制备所得的3μL浓缩纳米银胶体和3μL增效剂，立即用拉曼光谱仪进行扫描，获得目标物质的特征指纹图谱；所述增效剂具体为离子复配增效剂，具体复配配方按质量比如下：磷酸钠5%‑10%、硫酸铵0.1%‑1 %、α‑环糊精10%‑30%，其余均为超纯水。