[发明专利]一种高效薄层色谱和可调节的表面增强拉曼光谱联用快速检测奶制品中多种生物胺的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高效薄层色谱和可调节的表面增强拉曼光谱联用快速检测奶制品中多种生物胺的方法，具体涉及一种荧光标记生物胺分子和使用增效剂抑制荧光衍生试剂引起的掩蔽效应，属于食品检测技术领域。

背景技术

生物胺（biogenic amines）是氨基酸脱羧的产物，是评价食品腐败程度的一个重要指标。食物中含有高水平的生物胺严重危及消费者，其潜在的毒性能造成消费者过敏。因此，研究一种快速检测食品中生物胺残留的方法，成为监管食品行业中生物胺毒性危害亟待解决的问题。

在过去的几年中，高效薄层色谱作为高效且简易的分离平台受到广泛关注。但因其难以区分色谱分离结果邻近物质的干扰，在定性方面还需配合其他检测方法使用。高效薄层色谱与先进的检测方法联用已成为分析化学中一种新的跨学科的前沿技术，如质谱、原子荧光光谱、传感器和拉曼光谱等联用。特别是，高效薄层色谱（HPTLC）和表面增强拉曼光谱（SERS）的联用因其良好的特异性和简便性而广受欢迎。SERS除了具有超高灵敏度（甚至单分子）外，其不仅保留了常规拉曼光谱的优点，而且蕴含目标化合物结构的精细指纹信息，因此在常规筛选任务中SERS检测甚至可以不用标准物质。这些优势最终使HPTLC-SERS的适用性大为提升，因此非常适合基于分子结构信息的鉴别。

因此，本发明利用薄层色谱和表面增强拉曼光谱高效联用的方法，根据生物胺自身日光和紫外均不可见的缺陷，引入荧光标记生物胺分子的印迹，并使用增效剂抑制荧光衍生试剂引起的掩蔽效应，建立一种简便快速的生物胺测定方法。

发明内容

本发明的目的在于克服上述不足之处，提供一种高效薄层色谱和可调节的表面增强拉曼光谱联用快速检测奶制品中多种生物胺的方法。

按照本发明提供的技术方案，一种高效薄层色谱和可调节的表面增强拉曼光谱联用快速检测奶制品中多种生物胺的方法，其直接将表面增强拉曼光谱应用于化学衍生后的高效薄层色谱板，通过滴加一种新型增效剂抑制过度的荧光胺对目标物散射信号的掩蔽效应，调平了荧光衍生后的基线，且明确了多种生物胺分子的特征拉曼指纹图谱。具体检测方法为：

（1）纳米银胶的制备：取5mL的市售纳米银颗粒悬浮液（阿拉丁试剂公司）以4000r/min离心10min后，弃去4.5mL上清液，将剩余0.5mL液体置于混匀器上充分振荡1min，使其重新悬浮，得到10倍浓缩的纳米银胶体；

（2）样品的制备：

a、生物胺的标准溶液的制备：用甲醇为溶剂制备浓度为0.05mg/mL样品；

b、奶酪/酸奶样品中生物胺的提取：称取10g奶制品，加入10mL质量浓度为10%的三氯乙酸水溶液，用匀浆器混成匀浆；在匀浆中加入0.1mL 0.25g/mL NaOH溶液充分振荡混匀，置于3000r/min的离心机上离心5min，取2mL上清液，用0.45μm纤维膜过滤后使用；

（3）高效薄层色谱分离：将每样各2-4μL步骤（2）制备的生物胺的标准溶液及奶酪/酸奶样品提取物用薄层色谱点样仪进行精确点样，点样完成后用展开液展开，上行展开50mm取出硅胶板；用0.1mg/mL的荧光胺的丙酮溶液浸渍衍生，取下硅胶板在80℃平板加热器上加热3min，置于366nm紫外灯的照射下获取硅胶板的图像；

（4）HPTLC-SERS检测：将经过步骤（3）高效薄层色谱分离后所得硅胶板在366nm紫外光的照射下用铅笔标记出可见的荧光条带；在标记区域，用毛细移液管依次滴加步骤（1）制备所得的3μL浓缩纳米银胶体和3μL增效剂，立即用拉曼光谱仪进行扫描，获得目标物质的特征指纹图谱。

步骤（3）所述展开液配置按体积比计为，甲醇︰丙酮︰质量浓度为25%的氨水=3︰7︰0.5。

步骤（4）所述增效剂具体为离子复配增效剂，具体复配配方按质量比如下：磷酸钠5%-10%、硫酸铵0.1%-1 %、α-环糊精10%-30%，其余均为超纯水。

本发明的有益效果：本发明建立了一种识别多种生物胺（酪胺、腐胺和尸胺）结构的HPTLC-SERS检测方法，具有经济、快速、简便的优点；同时新型增效剂的选择性增强功能拓宽了HPTLC-SERS检测的适用范围，为直接快速检测化学衍生化的色谱板开辟了新的视野。

附图说明

图1是实施例1生物胺标准溶液的展开图（上）和对应斑点处拉曼指纹图谱（下）。a、酪胺；b、尸胺；c、腐胺。