[发明专利]一种提高币斑病菌基因组DNA提取质量的方法

摘要

本发明公开了一种提高草坪币斑病菌DNA提取质量的方法，包括如下步骤：培养皿中加入含有抗生素的MM培养基，在培养基表面铺上灭菌玻璃纸，挑取菌丝转移至培养基中间，25‑30℃黑暗条件培养7‑14d；刮取玻璃纸表面菌丝20‑50mg置于离心管中，通风干燥，往离心管中加入钢珠，液氮冷冻、磨碎菌丝；采用经典CTAB法提取得到基因组DNA，将基因组DNA溶解于TE缓冲液，静置24‑48h，离心，去除不溶于TE缓冲液的杂质。本发明通过使用MM培养基降低币斑病菌菌丝组织中的多糖含量，从而提高病原菌基因组DNA的提取质量，无需昂贵的仪器设备或DNA提取试剂盒，DNA提取质量显著提高、稳定性好且经济高效。

主权项

1.一种提高币斑病菌基因组DNA提取质量的方法，其特征在于包括如下步骤：步骤(1)、菌丝培养：培养皿中加入含有抗生素的MM培养基，在培养基表面铺设灭菌玻璃纸，挑取病原菌菌丝转移至培养基中间，25‑30℃黑暗条件培养7‑14d；其中，所述的含有抗生素的MM培养基的制备方法为：称取葡萄糖10g，K₂HPO₄ 1.5g，KH₂PO₄ 2g，(NH4)₂SO₄ 1g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，酵母浸粉2g，琼脂粉15g，加入去离子水溶解并定容到1L，121℃湿热灭菌20min，待培养基温度降至55‑60℃，加入氨苄青霉素、硫酸链霉素、四环素，使氨苄青霉素、硫酸链霉素、四环素的终浓度均为50mg/L；培养皿中培养基的厚度为1‑2mm；所述的病原菌为草坪币斑病菌；步骤(2)、菌丝准备：刮取玻璃纸表面菌丝20‑50mg置于离心管中，通风干燥12‑18h，往离心管中加入钢珠，使用液氮冷冻、粉碎机磨碎菌丝用于DNA提取；步骤(3)、DNA提取：采用经典CTAB法提取得到基因组DNA，将基因组DNA溶于TE缓冲液，静置24‑48h，离心，去除不溶于TE缓冲液的杂质。