[发明专利]黄体生成素重组蛋白饲料添加剂的制备及其使用方法

摘要

本发明公开了一种黄体生成素重组蛋白饲料添加剂的制备及其使用方法；本发明将金钱鱼的LH基因的cDNA序列全长，通过原核表达得到了金钱鱼LH重组蛋白，以及通过制作饲料的工艺制作饲料。本发明通过对模式生物青鳉的实验发现，投喂添加有黄体生成素LH重组蛋白的饲料可以使其性腺发育产生积极的变化。本发明制得的金钱鱼LH重组蛋白菌体可用作鱼类蛋白饲料添加剂，在于对鱼类的性腺发育产生促进作用。

主权项

一种重组蛋白饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1、克隆获得金钱鱼黄体生成素LH基因序列全长，与pGEM‑T Easy载体连接后转化至DH5α感受态细胞，涂板挑菌，扩增培养之后，提取包含目的基因LH和载体pGEM‑T Easy的质粒；S2、选择酶切位点NdeI(238)，XhoI(158)分别对步骤S1提取得到的质粒DNA进行双酶切，回收有效片段，纯化；S3、将步骤S2回收、纯化得到的目的基因的回收产物导入BL‑21表达感受态细胞；摇菌、挑菌，选取有效菌液进行诱导培养，SDS、Western验证蛋白表达，一80℃甘油保存有效菌液；S4、取步骤S3获得并保存的pET‑LH/BL菌液振荡培养，进行LH重组蛋白诱导表达；挑取单克隆菌落进行扩增培养，收集沉淀，得黄体生成素重组蛋白菌体，即所述重组蛋白饲料添加剂。