[发明专利]银纳米簇检测玻璃体液中钾离子浓度推断死亡时间的方法

摘要

本发明属于法医学技术领域，具体涉及一种银纳米簇检测玻璃体液中钾离子浓度推断死亡时间的方法。本发明方法是以含有钾离子适配体的新型DNA链为模板，合成具有荧光性质的DNA‑AgNCs，该体系特异性识别K⁺使银纳米簇荧光猝灭，根据荧光的变化绘制标准曲线，待测玻璃体液加入DNA‑AgNCs溶液中，玻璃体液中的钾离子导致银纳米簇荧光发生改变，与标准曲线相比，得出被测玻璃体液中钾离子浓度，将玻璃体样本中K⁺浓度与已知死亡时间绘制出标准曲线，结果与报道的死亡时间和玻璃体液钾离子关系具有良好一致性。本发明可用于法医死亡时间推断，具有高度特异性和灵敏度，操作简单、快捷，成本低廉且可应用于其它体液及水环境中钾离子含量的检测。

主权项

1.一种银纳米簇检测玻璃体液中钾离子浓度推断死亡时间的方法，其特征在于，按照以下步骤进行：(1)制备荧光DNA‑AgNCs：首先设计含有钾离子适配体且可装载AgNCs的DNA链，在DNA链中加入AgNO₃溶液，振荡后加入NaHB₄溶液，再次振荡后放入冰箱3小时，得棕黄色液体，即荧光DNA‑AgNCs；所述的含有钾离子适配体且可装载AgNCs的DNA链是能够形成G‑四聚体的DNA链，选自核苷酸序列表ID NO.1、核苷酸序列表ID NO.2、核苷酸序列表ID NO.3、核苷酸序列表ID NO.4、核苷酸序列表ID NO.5、核苷酸序列表ID NO.6、核苷酸序列表ID NO.7、核苷酸序列表ID NO.8、核苷酸序列表ID NO.9、核苷酸序列表ID NO.10、核苷酸序列表ID NO.11、核苷酸序列表ID NO.12、核苷酸序列表ID NO.13所示DNA序列；所述的DNA链与AgNO₃、NaHB₄摩尔浓度比为1:2～10:2～10，优选1:6:6；(2)制备钾离子浓度与荧光强度标准曲线：配制不同浓度钾盐溶液，将其加入至步骤(1)的荧光DNA‑AgNCs溶液中，反应一段时间后测量其在630nm处的荧光强度，得到钾离子浓度与荧光强度的标准曲线；(3)实际玻璃体液样本钾离子浓度检测：将已知死亡时间的待测玻璃体液加入至步骤(1)的荧光DNA‑AgNCs溶液中，反应一段时间后测量其在630nm处的荧光强度，根据制备步骤(2)的钾离子浓度与荧光强度标准曲线得出所测样本中K⁺浓度；(4)制备钾离子浓度与死亡时间标准曲线：根据步骤(3)中所测得已知死亡时间的玻璃体液K⁺浓度与已知样本的死亡时间，绘制线性关系图，制得钾离子浓度与死亡时间的标准曲线；(5)死亡时间推断：测定未知死亡时间的待测玻璃体液K⁺浓度，根据步骤(4)的钾离子浓度与死亡时间标准曲线，从而推断出所测样本的死亡时间。