[发明专利]用于扩增荧光假单胞菌基因的PCR引物、荧光假单胞菌的检测方法及试剂盒有效
| 申请号： | 201610912332.6 | 申请日： | 2016-10-19 |
| 公开（公告）号： | CN106498046B | 公开（公告）日： | 2019-07-02 |
| 发明（设计）人： | 徐煜;刘振民;游春苹 | 申请（专利权）人： | 光明乳业股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/39 |
| 代理公司： | 北京东正专利代理事务所(普通合伙) 11312 | 代理人： | 李梦福 |
| 地址： | 201103 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一组用于扩增荧光假单胞菌基因的PCR引物，正向引物为：5’‑ATGTGGCGTGAAACCAAAAT‑3’，反向引物为：5’‑TCAATCATCCGCCTGTTCA‑3’，所述PCR引物用于扩增荧光假单胞菌的生物膜形成调控基因。采用上述技术方案中的PCR引物用于待测菌株基因的PCR扩增，通过检测adnA基因的是否存在，从而有针对性的、准确快速地检测出具有生物膜形成能力的荧光假单胞菌。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 扩增 荧光 假单胞菌 基因 pcr 引物 检测 方法 试剂盒 | ||
【主权项】：
1.一种检测原料乳生产过程中具有生物膜形成能力的荧光假单胞菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：（a）培养待测菌株；（b）提取待测菌株的DNA，获得模板DNA：（c）进行PCR扩增，PCR反应体系包括：序列为5’‑ ATGTGGCGTGAAACCAAAAT ‑3’的正向引物、序列为5’‑ TCAATCATCCGCCTGTTCA ‑3’的反向引物、PCR缓冲液、脱氧核糖核苷三磷酸、Taq酶、模板DNA以及ddH2O；反应体系中正向引物和反向引物的最终浓度均为1μM，Taq酶的最终浓度为0.2‑0.5U/μl，PCR缓冲液包括KCl、Tris‑HCl和MgCl2，三者在反应体系中的最终浓度分别为50 mM、10 mM和1.5 mM，脱氧核糖核苷三磷酸最终浓度为0.25μM；PCR扩增的反应条件包括：94℃，预变性5min；94℃变性15s，57℃退火30 s，72℃延伸1min50s，循环40次；72℃延伸10min；（d）将步骤（c）扩增得到的产物进行电泳，1.5Kb处出现条带代表待测菌株是具有生物膜形成能力的荧光假单胞菌。
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