[发明专利]一种联合苹果愈伤组织细胞培养和遗传转化鉴定苹果抗病基因的方法

摘要

本发明公开了一种联合苹果愈伤组织细胞培养和遗传转化鉴定苹果抗病基因的方法。本发明提供了一种鉴定目的基因为苹果抗病相关基因的方法，为利用苹果愈伤组织作为转化受体，鉴定目的基因是否为苹果抗病相关基因。本发明的实验证明了本发明利用苹果愈伤组织转化进行苹果抗病基因功能鉴定，克服了苹果植株转化周期长、转化难等在开展苹果抗病基因功能研究中的技术壁垒，大大提高了苹果抗病基因的筛选效率，为筛选与鉴定苹果抗病基因提供了一个高效、简易的方法，使苹果重要抗病基因的发掘成为可能。该方法具有高效、易行、耗时短的特点，它为苹果抗病基因的筛选鉴定与苹果抗病基因作用机制的深入研究奠定了基础和可能。

主权项

1.一种鉴定目的基因为苹果抗病相关基因的方法，为利用苹果愈伤组织作为转化受体，鉴定目的基因是否为苹果抗病相关基因；所述方法包括如下步骤：1）提高或沉默所述苹果愈伤组织中目的基因的表达，得到转目的基因愈伤组织细胞或沉默目的基因愈伤组织细胞；2）将所述转目的基因愈伤组织细胞或所述沉默目的基因愈伤组织细胞、和所述苹果愈伤组织细胞分别接种引发苹果发病的某种病原菌，得到接种后转目的基因愈伤组织细胞、接种后沉默目的基因愈伤组织细胞和接种后苹果愈伤组织细胞；观察抗病力，若所述接种后转目的基因愈伤组织细胞或所述接种后沉默目的基因愈伤组织细胞与所述接种后苹果愈伤组织细胞的抗病力有显著差异，则目的基因为或候选为苹果抗该病原菌引发病相关基因；若所述接种后转目的基因愈伤组织细胞或所述接种后沉默目的基因愈伤组织细胞与所述接种后苹果愈伤组织细胞的抗病力无显著差异，则目的基因不为或候选不为苹果抗该病原菌引发病相关基因；所述提高苹果愈伤组织中目的基因的表达为将目的基因导入苹果愈伤组织；所述沉默苹果愈伤组织中目的基因的表达为将干扰所述目的基因表达的物质导入苹果愈伤组织；所述苹果愈伤组织为苹果叶片愈伤组织；或，所述病为苹果轮纹病；或，所述病原菌为苹果轮纹病病菌；所述目的基因为序列2所示的蛋白的编码基因或序列4所示的蛋白的编码基因或序列6所示的蛋白的编码基因；所述干扰序列2所示的蛋白的编码基因表达的物质为序列7所示的核苷酸或者表达序列7所示核苷酸的重组载体。