[发明专利]鉴别ISAV的双重实时荧光RT-PCR方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种鉴别ISAV的双重实时荧光RT‑PCR方法及试剂盒，设计特异性引物和Taq Man探针，用于鉴定ISAV，另设计一套引物和探针，用于区分致病力差异毒株，建立单管中鉴定ISAV并区分ISAV‑HPR0和HPRΔ的双重Taq Man荧光定量PCR方法。本发明的方法高效、敏感、特异、定量、重复性好，在口岸检疫中具有广阔的应用前景，对于ISAV致病力差异毒株的鉴别诊断具有一定的参考意义。

主权项

双重TaqMan实时荧光定量RT‑PCR鉴定传染性鲑鱼贫血病毒的方法，其特征在于，以待鉴定样本的病毒RNA为模版，利用对应传染性鲑鱼贫血病毒HE基因的特异性引物对和探针HE‑Probe，对应传染性鲑鱼贫血病毒NS基因的特异性引物对和探针NS‑Probe，进行实时荧光定量PCR反应；所述对应传染性鲑鱼贫血病毒HE基因的特异性引物对的上游引物HE‑F序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物HE‑R序列如SEQ ID NO:2所示，探针HE‑Probe的序列如SEQ ID NO:3所示，SEQ ID NO:1：5’‑AAACTTCAGAGGAACATCAC‑3’，SEQ ID NO:2：5’‑CTGCTACACCCATAGAAAT‑3’，SEQ ID NO:3：5’‑TGAACCAAACATTCAATACAAACCAAG‑3’；所述对应传染性鲑鱼贫血病毒NS基因的特异性引物对的上游引物NS‑F序列如SEQ ID NO:4所示，下游引物NS‑R序列如SEQ ID NO:5所示，探针NS‑Probe序列如SEQ ID NO:6所示，SEQ ID NO:4：5’‑TTCATCTACGAGAAGCCT‑3’，SEQ ID NO:5：5’‑CACATTCTGAAGTGAAGTCC‑3’，SEQ ID NO:6：5’‑CAATGAGAGAGCTGGAGTTGAGC‑3’。