[发明专利]从富含多糖类的真菌中提取mRNA的方法及其试剂盒

摘要

本发明涉及从富含多糖类的真菌中提取mRNA的方法及其试剂盒。该方法包括：以纤维素粉预制离心柱；以CTAB提取液、有机溶剂混合液去除真菌菌丝中的杂质；将mRNA吸附于纤维素粉，清洗去除杂质后，将mRNA洗脱下来，沉淀后溶解保存备用。该试剂盒包括：离心柱，离心管，纤维素粉，CTAB提取液，清洗缓冲液，洗脱缓冲液等。本发明能有效去除真菌中的多糖类物质并获得高质量mRNA，同时能显著降低提取成本。

主权项

一种从富含多糖类的真菌中提取mRNA的方法，其特征是，包括以下步骤：第一步、U1、采用离心柱，所述离心柱内具有孔径为预设数值的筛板，所述筛板将离心柱内部分为用以容纳固液混合物或离心后所剩固相物的上部空间、以及用以排出离心后通过筛板的液相物的下部空间；U2、向离心柱中加入纤维素粉，并加入清洗缓冲液浸泡后，离心弃滤液；U3、以清洗缓冲液进行清洗，离心弃滤液；清洗次数为至少一次；所得离心柱备用；第二步、S1、取真菌菌丝，加液氮后研磨成粉末；将粉末转移至离心管内；S2、向CTAB提取液中加入蛋白酶K，然后将CTAB提取液加至离心管内并混匀；将离心管于65℃±5℃水浴中孵育；S3、向离心管中加入由苯酚、氯仿、异戊醇构成的混合液，并在振荡后离心，取上清液；S4、向上清液中加无水乙醇，直至乙醇终浓度为体积比30‑35％，即得待处理溶液；第三步、T1、将第二步所得待处理溶液加入第一步所得离心柱内，混匀并静置后，离心弃滤液；T2、以清洗缓冲液进行清洗，离心弃滤液；清洗次数为至少一次；T3、向离心柱内加入洗脱缓冲液，离心并收集滤液；T4、向所收集的滤液中加入异丙醇进行沉淀；之后，离心弃上清，洗涤沉淀后，以经DEPC处理过的H₂O溶解，并保存备用，此即从真菌中提取获得的mRNA溶液；其中，所述清洗缓冲液为含有体积比30‑35％乙醇的STE缓冲液；所述洗脱缓冲液为含有体积比17‑20％乙醇的STE缓冲液；所述STE缓冲液由Tris、NaCl、EDTA以及经DEPC处理过的H₂O混匀而成；所述CTAB提取液由CTAB、Tris·Cl、EDTA、NaCl、β‑巯基乙醇以及H₂O混匀而成。