[发明专利]快速制备海洋珍稀鱼类或贝类中期分裂相染色体的方法

摘要

快速制备海洋珍稀鱼类或贝类中期分裂相染色体的方法，属于海洋生物技术领域，所述方法包括：1)试验鱼或贝的暂养及载玻片的清洗；2)在确保试验动物存活状态良好后选取鳍条或鳃部有伤口的鱼或贝类单独饲养；3)取试验动物创口处的愈合增生组织进行染色体制备；本发明制备中期分裂相染色体的方法简单快捷，便于操作，充分利用愈合增生组织旺盛的分裂增生能力，制备染色体后基本保证试验动物仍能健康存活，可重复多次制备，所需试验动物可少至1个个体，适用于各种海洋珍稀鱼类和贝类。本发明可保证实验样品新鲜，细胞活性好，克服珍稀鱼类或贝类大多属于成熟或衰老状态、细胞分裂不旺盛的困难，制备的中期分裂相染色体形态好，分散度好，便于观察和计数。

主权项

1.快速制备栉江珧中期分裂相染色体的方法，其特征在于所述方法的步骤包括：1）栉江珧成贝的暂养及玻片的清洗；2）在确保试验栉江珧存活状态良好后在鳃丝边缘制造一个微小伤口后单独饲养； 3）用所取少量创口愈合增生组织进行染色体制备；具体步骤如下：/n把栉江珧放到提高2-3℃的水体中精养1-2天；提前准备好染色体制片的载玻片，要求干净无油污，不挂水，在染色体制备前清洗干净；先用中浓度重铬酸钾洗液浸泡24小时以上，所述中浓度重铬酸钾洗液为浓硫酸200ml，蒸馏水200ml和重铬酸钾20g，然后用纯净水反复冲洗至洗液完全冲尽后控干水分，浸泡到无水乙醇中12小时，取出后酒精灯烧制，冷却后装盒备用，切勿用手碰触载玻片表面造成油渍污染；把栉江珧拿出水体阴干，半小时后，栉江珧会自己张开双壳，用一个1cm厚的软塑料板塞在壳腹缘处使双壳无法闭合，迅速沿鳃丝边界取0.2cm宽，0.3cm长的鳃丝，制造微小创面，把栉江珧放回水体中精养2-3天后，再取该创面1-8mm³愈合增生组织；如果有栉江珧鳃丝边缘有自然的创伤则直接取创伤口处的愈合增生组织；所取愈合增生组织在过滤海水中漂洗后放入含有质量比0.04%秋水仙素的50%海水中处理30-45分钟，所述50%海水为纯净水与海水以体积比1:1混合，然后用0.075mol/L的KCL溶液低渗30-45分钟，再用预冷的新鲜配制的卡诺氏液充分固定，所述的卡诺氏液甲醇：冰醋酸的体积比为3:1；连续更换固定液3次，每次固定15分钟，每一步骤过程中都需要轻轻摇晃处理样品的试管，使作用更充分；/n然后采用热滴片法制片，制片时先用50%的冰醋酸溶液解离鳃组织或愈合增生组织成细胞悬液，通过弹壁或吸管吹打的方式，使细胞从组织团块中解离出来，放在4℃冰箱中预冷，载玻片放在光滑石板上或金属面上预热，石板或金属面用电炉加热至55-60℃，吸取解离的细胞悬液，从70cm的高处滴3滴至预热的载玻片上，用剪成的4层滤纸碎片的尖角快速吸干滴液，并把滴片移至旁边晾干，市售10%吉姆萨工作液染色30分钟，自来水流水冲洗载玻片表面多余的染色液10秒钟，晾干后即可镜检，观察染色体形态。/n