[发明专利]一种卵泡刺激素生物活性强度检测方法

摘要

一种卵泡刺激素生物活性强度检测方法，包括以下步骤：（1）无卵泡刺激素血清的制备：（2）支持细胞的准备，（3）受检者血清样品中卵泡刺激素生物活性强度的分析：将雌二醇的检测结果在卵泡刺激素标准曲线上反算，查出待测样本中卵泡刺激素生物活性强度。本发明的方法（即睾丸细胞法）可以检出待测样本中卵泡刺激素生物活性强度，灵敏度高。

主权项

一种卵泡刺激素生物活性强度检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（一）无卵泡刺激素血清的制备：将硅橡胶管塞满雌二醇结晶，皮下植入动物背部4‑6周用以抑制动物卵泡刺激素的分泌；收集40‑60毫升动物血清，加入10‑20mg的活性炭，在室温下吸附12小时以上，用滤纸过滤除去甾体激素，滤液存于‑40～‑80℃冰箱中保存；（二）支持细胞的准备：取动物睾丸2个，去包膜，按4～6.5ml 199培养液/2个睾丸的用量，将睾丸放于199培养液中，再加入胶原酶III和分离酶II，使培养液中胶原酶III的最终浓度为0.25－0.29mg/ml，分离酶II的最终浓度为0.11－0.15μg/ml；在34～37℃孵育15～20分钟，所得悬浮液用等量199培养液稀释，过滤后往滤液中加入聚蔗糖，使聚蔗糖终浓度为11～14g/100mL，将其在1000～1500g下离心3～20分钟；将离心所得含支持细胞的沉淀用4～8mL 199培养液重悬；然后，加入3‑异丁甲基黄嘌呤、牛血清蛋白和胎牛血清；用台盼蓝排除法做活细胞计算，得支持细胞悬液；（三）受检者血清样品中卵泡刺激素生物活性强度分析：（A）血清样品中的卵泡刺激素刺激支持细胞产生雌二醇：取70‑100μl步骤（二）所得支持细胞悬液，加受检者血清30‑50μl；同时取70‑100μl步骤（二）所得支持细胞悬液，加30‑50μl磷酸盐缓冲液稀释过的各浓度的卵泡刺激素标准品；将配置好的试剂在37℃，用5% CO₂ 和95%O₂孵育4－6小时后，加入1.5－1.6ml含0.01－0.012g/100mL硫柳汞明胶的磷酸盐缓冲液以终止反应；（B）雌二醇的检测：将经过步骤（Ａ）处理的受检者血清样品及标准品按照现有雌二醇检测试剂盒或其它方法进行雌二醇浓度的检测，绘制卵泡刺激素生物活性强度－雌二醇浓度标准曲线；（c）卵泡刺激素浓度的推算：将受检者血清样品中雌二醇的检测结果在卵泡刺激素生物活性强度－雌二醇浓度标准曲线上反算，查出待测样本中卵泡刺激素生物活性强度。