[发明专利]一种美洲大蠊的质量检测方法

摘要

本发明公开了一种美洲大蠊的质量检测方法，包括性状、鉴别、检查、含量测定，本发明在原标准基础上增加了肌苷化合物、氨基酸的检测指标，并对原质量标准进行了修订，解决了原质量标准存在的系列技术问题，能从根本上控制心脉隆注射液原料的质量。本发明的质量检测方法的测定结果有良好的稳定性、重现性和准确性且保证了美洲大蠊较高的质量标准水平。

主权项

一种美洲大蠊的质量检测方法，其特征在于所述的美洲大蠊的质量检测方法如下：1）性状：本品呈类椭圆形，长27‑32mm，宽10‑30mm，赤褐色，前胸背板6‑9mm，略呈梯形，前窄后宽，后缘缓弧形，中部有一赤褐色大斑或大斑不明显；其后缘中央微向后延伸，雄虫肛上板横宽，半透明，后缘有较大的三角形缺口，腹部第一背板无毛茸；雌虫肛上板略呈长三角形，不透明，后缘呈三角形切口；2）鉴别：取本品粉末2~4g，加乙醇20~40ml，加热回流20~40min，取出，放至室温，滤过，滤液作为供试品溶液，另取丙氨酸对照品，加乙醇制成每1ml含200μg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部的薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积配比为4:1:1的正丁醇‑冰醋酸‑水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%茚三酮丙酮溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；3）检查：a、水分：照中国药典一部的水分测定法进行试验，水分含量不得过10%；b、总灰分：照中国药典一部的总灰分测定法进行试验，总灰分不得过8%；c、酸不溶性灰分：找中国药典一部的酸不溶性灰分测定法进行试验，酸不溶性灰分不得过1.6%；d、指纹图谱：色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以 0.05mol/L乙酸钠缓冲液为流动相B；流速为每分钟0.6ml，柱温为30℃，按下表进行梯度洗脱；检测波长为254nm，理论板数按肌苷峰计，应不低于5000；时间（min）流动相A（%）流动相B（%）0→150→20100→8015→300100对照品溶液的制备：取肌苷对照品适量，精密称定，加流动相A制成每1ml含70μg的溶液，摇匀，作为对照品溶液；供试品溶液的制备：取本品粉末20g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入95%乙醇200ml，称定重量，于水浴上回流提取1h，放冷，再称定重量，用95%乙醇补足减少的重量，摇匀，滤过，取续滤液100ml减压浓缩至干，残渣精密加水20ml于60℃充分温溶，摇匀，冷却，离心或过滤，取续滤液5ml，通过强碱性阴离子交换树脂层析柱，用水10ml洗脱，弃去水洗脱液，再用0.25mol/L醋酸溶液洗脱，弃去初洗脱液5ml，收集续洗脱液25ml，摇匀,作为供试品溶液；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5µl，注入液相色谱仪，记录30分钟内的色谱图；供试品色谱图应与标准指纹图谱基本一致，将供试品色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统与标准指纹图谱相比较，计算相似度，相似度应不低于0.90；e、微生物限度：照中国药典一部的微生物限度检查法进行检查，大肠埃希菌每1g不得检出，沙门菌每10g不得检出；4）浸出物：照中国药典一部醇溶性浸出物测定法项下的热浸法进行测定，使用95%的乙醇作为溶剂，浸出物不得少于20%；5）含量测定：a、肌苷 高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以 0.05mol/L乙酸钠缓冲液为流动相B；流速为每分钟0.6ml，柱温为30℃，按下表进行梯度洗脱；检测波长为254nm，理论板数按肌苷峰计，应不低于5000；时间（min）流动相A（%）流动相B（%）0→180→20100→8018→300100对照品溶液的制备：取肌苷对照品适量，精密称定，加流动相A制成每1ml含70μg的溶液，摇匀，作为对照品溶液；供试品溶液的制备：取本品粉末20g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入95%乙醇200ml，称定重量，于水浴上回流提取1h，放冷，再称定重量，用95%乙醇补足减少的重量，摇匀，滤过，取续滤液100ml减压浓缩至干，残渣精密加水20ml于60℃充分温溶，摇匀，冷却，离心或过滤，取续滤液5ml，通过强碱性阴离子交换树脂层析柱，用水10ml洗脱，弃去水洗脱液，再用0.25mol/L醋酸溶液洗脱，弃去初洗脱液5ml，收集续洗脱液25ml，摇匀,作为供试品溶液；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5µl，注入液相色谱仪，测定即得；结果计算：式中：C：每100g供试品中肌苷的含量（mg）；C_x：供试品液肌苷含量（mg）；S：供试品取样量（mg）；W（%）：供试品水分含量；n：稀释倍数（200倍）；本品按干燥品计算，每100g含肌苷（C₁₀H₁₂N₄O₅）应为60~120mg；b、氨基酸：标准曲线的制备 取谷氨酸对照品20mg，精密称定，置200ml量瓶中，加水150~170ml温热使溶解，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，分别置具塞试管中，各加水至1.0ml，各加入0.2mol/L枸橼酸缓冲液1.0ml与茚三酮试液1.0ml，摇匀，置水浴中加热15分钟，取出，立即冷却，放置5～10min，各加入60％乙醇3.0ml，摇匀，照中国药典一部的紫外‑可见分光光度法，以相应试剂为空白，在570nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；游离氨基酸精密量取指纹图谱项下残渣精密加水20ml于60℃充分温溶，摇匀，离心或过滤的供试品溶液0.4ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，精密量取1ml，照标准曲线的制备方法，自“各加入0.2mol/L枸橼酸缓冲液1.0ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中游离氨基酸的含量C₁，按下式计算，即得；结果计算：式中：C_游：每1g供试品中游离氨基酸含量（mg）；C₁： 供试品反应液的浓度（mg/ml）；S：供试品取样量（mg）；W（%）：供试品水分含量；n：稀释倍数（5000倍）；结合氨基酸 精密量取含量测定肌苷项下供试品溶液0.4ml于水解管中，加盐酸0.4ml，封口或拧紧螺丝盖，将已封口的水解管放在110℃±1℃的恒温干燥箱内，水解8小时后，取出，冷却；打开水解管，转移至蒸发皿中，用去离子水多次冲洗水解管，蒸干，残渣加去离子水适量使溶解并转移至50ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，作为供试品水解液；精密量取1ml，照标准曲线的制备方法，自“各加入0.2mol/L枸橼酸缓冲液1.0ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中游离氨基酸的含量C₂，按下式计算，即得；结果计算：式中：C结：每1g供试品中结合氨基酸含量（mg）；C₂：供试品反应液的浓度（mg/ml）；S：供试品取样量（mg）；W（%）：供试品水分含量；n：稀释倍数（5000倍）；本品按干燥品计算，每g含游离氨基酸以丙氨酸（C₃H₇NO₂）计，应不低于6.0mg；每g含结合氨基酸以丙氨酸（C₃H₇NO₂）计，应不低于5.0mg。