[发明专利]一种检测NPM1基因突变分型的试剂盒

摘要

本发明涉及一种检测NPM1基因突变分型的试剂盒，包括RT‑PCR反应液、引物探针混合液、RT‑PCR反应酶系、DEPC H₂O以及分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒。由于本试剂盒应用一步法实时荧光PCR反应模式，并对特异性探针进行LNA修饰，能超敏快速检测急性髓性白血病患者骨髓及外周血样本中的NPM1基因12外显子突变，最低检出量为0.2ng，同时根据不同通道信号值可对A型、B型、D型突变进行分型，同时加入内标控制系统可检测样本提取效果，可广泛应用于急性髓性白血病化疗效果的预估。

主权项

1.一种检测NPM1基因突变分型的试剂盒，包括：1)RT‑PCR反应液、引物探针混合液、RT‑PCR反应酶系、DEPC H₂O、阴性质控品、以及阳性质控品，和2)分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒；其中引物探针混合液由NPM1突变A型、B型、D型基因特异性的引物、探针及内标组成，分别如下：1)NPM1基因特异性的正向和反向引物的序列分别是：5’‑GGTGGTTCTCTTCCCAAAG‑3’和5’‑CTGTTACAGAAATGAAATAAGACG‑3’；2)突变A型特异性锁核酸探针的序列是5’‑CAAGATCTCTGT+CT+GGCAGTGG‑3’，探针的5’和3’端分别结合有荧光发生基团FAM和荧光淬灭基团BHQ1；3)突变B型特异性锁核酸探针的序列是5’‑CAAGATCTCTGC+AT+GGCAGTGG‑3’，探针的5’和3’端分别结合有荧光发生基团TEXASRED和荧光淬灭基团BHQ2；4)突变D型特异性锁核酸探针的序列是5’‑CAAGATCTCTGC+CT+GGCAGTGG‑3’，探针的5’和3’端分别结合有荧光发生基团CY5和荧光淬灭基团BHQ2；5)内标TBP基因特异性的正向和反向引物的序列分别是5’‑CTAAAGACCATTGCACTTCGT‑3’，5’‑ATCAGTGCCGTGGTTCGTG‑3’；6)内标TBP基因特异性的探针序列是5’‑AATCCCAAGCGGTTTGCTGCGGTAA‑3’，探针的5’和3’端分别结合有荧光发生基团HEX和荧光淬灭基团BHQ1；其中各序列种“+”表示对右侧碱基进行LNA修饰。