[发明专利]一种从蛞蝓中提取蜗牛酶的方法

摘要

本发明公开了一种从蛞蝓中提取蜗牛酶的方法，属于蜗牛酶提取技术领域。本发明以蛞蝓为原料，粉碎得匀浆液与制得的咪唑盐离子液体混合，搅拌萃取，过滤得含有蜗牛酶的离子液体，加入磷酸盐溶液，分层后在向其中加入硫酸铵，离心得沉淀，再向沉淀物中加入三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲溶液，经透析浓缩，得蜗牛酶液，进行冻干，从而得到从蛞蝓中提取蜗牛酶的方法。实例证明，本发明方法独特新颖，利用蛞蝓为原料，变害为宝，且在提取的过程中无需对原料内脏进行分离，简化了工艺，缩短了时间，最终制得的蜗牛酶纯度高达95％以上，收率提高至90％以上，在常温下活性保持良好，可进行大规模量产，具有良好的经济效益和社会效益。

主权项

一种从蛞蝓中提取蜗牛酶的方法，其特征在于具体提取步骤为：（1）用清水洗净两只重量均为30～40g新鲜活体野蛞蝓，将洗净的蛞蝓放入烧杯中，向烧杯中加入300～400mLpH7.4～7.6磷酸盐溶液，将烧杯中的物质倒入高速组织捣碎机中，以8000～10000r/min的速度匀浆20～30min，充分粉碎得匀浆液，备用；（2）量取200～300mL去离子水加入到单口烧瓶中，向单口烧瓶中加入2～3g1‑甲基‑5‑氯咪唑，移入冰水浴中，控制温度为0～5℃，边搅拌边向烧瓶中加入100～200mL质量浓度为40%六氟磷酸溶液，搅拌反应2～3h，自然冷却至室温，分液，得有机相，用饱和碳酸钠洗涤有机相，直至有机相呈中性，再减压蒸馏，得到无色液体，即咪唑盐离子液体；（3）将上述咪唑盐离子液体和1～2g磷酸氢二钾加入到上述步骤（1）备用的匀浆液中，搅拌萃取40～50min，过滤，得滤液，将滤液静置分层，去上层，得到含有蜗牛酶的离子液体；（4）向上述含有蜗牛酶的离子液体中加入300～400mLpH7.4～7.6磷酸盐溶液，搅拌50～60min，静置分层，分液得到含有蜗牛酶的磷酸盐溶液，即粗酶液；（5）向上述粗酶液中加入3～5g硫酸铵，搅拌10～20min，于0～4℃冰箱内，静置5～6h，用4000～6000r/min离心机离心10～20min，得沉淀，将沉淀加入到盛有100～200mLpH7.4～7.6三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲溶液的烧杯中，搅拌10～20min后，装入透析袋中用去离子水透析72～74h，将保留液置于浓缩罐中浓缩3～4h，得到蜗牛酶液；（6）将上述蜗牛酶液置于‑10～‑15℃真空冷冻干燥器内，冻干24～26h，得到白色粉末，即蜗牛酶。