[发明专利]一种凡纳滨对虾抗性相关的多组合分子标记和应用

摘要

本发明属于水产动物种质创新技术领域，具体涉及一种基于多标记组合辅助凡纳滨对虾抗WSSV选育的方法及其应用。利用高通量分型技术对凡纳滨对虾免疫信号通路的SNP位点在敏感群体和抗性群体中进行SNP标记分型，获得了6个与抗WSSV显著相关的SNP分子标记。利用多标记互作分析方法，筛选获得了一种最优的抗性标记组合，该标记组合包括nLvALF2g‑89‑A>G,Unigene34569g‑97‑T>C和TRAF6g‑139‑A>G，三个标记的AA‑TT‑AA,AA‑CT‑AA,AA‑CT‑AG,AG‑CT‑AA的四种基因型组合表现出与WSSV抗性明显的关联优势。本发明为对虾抗病分子选育提供了候选的标记，为对虾分子标记辅助抗性育种提供了一种新的途径，在对虾抗WSSV品种选育的研究中具有广阔的应用前景。

主权项

1.一种用于检测对凡纳滨对虾抗性相关的标记组合进行分型的Multiplex SnaPshot引物组合，其特征在于：ALF2g‑89‑A>G位点的扩增引物对为：ALF2F：5’‑ AACCCTTTCGCTCCCACC‑3’，ALF2R：5’‑ TGGATGAGGTATCAACATTCGC‑3’；Unigene34569g‑97‑T>C位点的扩增引物对为：Unigene34569F：5’‑ ACTTGGGCAACGTCATCG‑3’，Unigene34569R：5’‑ GAGTTCCAGTCCAGGGAAATG‑3’；TRAF6g‑139‑A>G位点的扩增引物对为：TRAF6F：5’‑ TATCACATGGAAATCTGAACAGTA‑3’，TRAF6R：5’‑ GGATTACGAGCAACATCAGGA‑3’；以及，ALF2g‑89‑A>G位点的延伸引物：ALF2G:5’‑ TTTTTTTTTTTTTTTTTTCGGTGATGAGACCCGCGC‑3’Unigene34569g‑97‑T>C位点的延伸引物：Unigene345695G:’‑TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGTGGCTCGCATCTCCTTATT‑3’；TRAF6g‑139‑A>G位点的延伸引物：TRAF6G:5’‑ TCTGTGATATGGTTTTTAGGTAATGATA‑3’；对凡纳滨对虾抗性相关的标记组合标记位点分别位于SEQIDALF2序列的89 bp， SEQIDUnigene34569g序列的97 bp和SEQIDTRAF6g序列的 139 bp；所述SEQIDALF2序列如AACCCTTTCGCTCCCACCCACAGCCGAGACCCGTAGCAGATCGGGCGTGGTAGGCAGAACGACGCAGGACTTCGTCAGGAAAGCTTTC[A/G]GCGCGGGTCTCATCACCGAATCAGAGGCCCAAGTTTGGCTTAATAGTTAAGGCGAAGAAGAACGACACGCAGATATAATTTAAAAGAGCGCCATGGAAGGGATCTCATTAATGGTATATCCAAATTCTTCCGCGAATGTTGATACCTCATCCA所示；所述SEQIDUnigene34569g序列如GAAAAACCACGGCAGCCCCTTGGACTTCCACCGCCACGCCGGCGACTTGGGCAACGTCATCGCCGACTACAACGGCGTGGCTCGCATCTCCTTATT[C/T]GACAGGCACATTTCCCTGGACTGGAACTCTCCGGTATACATCGGCGGGCTCGCCTTCGTCATCCACGCCGGCGAGGA所示：所述SEQIDTRAF6g序列如TGTCTTCGAACAAATATCACATGGAAATCTGAACAGTATTTTTTGACTCTATTTATTCATGGAATGCAAAGTGAGAATGATGACTTTCTTGACTGGCCCTTTAGTGGACGCATAACACTTTCTGTACTAGACTGTGAT[G/A]TATCATTACCTAAAAACCATATCACAGAGACCATGGTGACAAAACCAGGTCTGCAGGCATTCAAGCGTCCTGATGTTGCTCGTAATCCAAAAGGATTTGGATTCACAGAATTTGTACCCCTTGCAAAAATACTTCAACCC所示；三个标记的凡纳滨对虾抗性相关的基因型组合分别为AA‑TT‑AA, AA‑CT‑AA, AA‑CT‑AG, AG‑CT‑AA。