[发明专利]一种扫描电镜的样品制备方法

摘要

本发明公开了一种扫描电镜的样品制备方法，该方法步骤包括以下步骤：粪样处理；尼龙袋包裹洗涤；培养皿静置洗涤；高速水流冲洗；换水；吸水干燥；样品台准备；样品喷金镀膜。通过干燥、碾破、浸泡、尼龙袋包裹洗涤、高速水流冲洗、吸水，干燥，镀金等工艺，制备的扫描电镜样品干净无杂质，无砂砾沉淀，残渣损失小，分布均匀，肉眼观察残渣样品清晰，扫描电镜观察时残渣结构清晰完整，视野干净，图像立体感强，有利于开展反刍动物消化后粪便中未消化牧草残渣超微结构的观察和研究，对于直观了解和评价反刍动物消化道微生物对粗饲料纤维结构的降解及提高秸秆饲料利用率有重要意义。

主权项

1.一种扫描电镜的样品制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、粪样处理：将采用集粪袋收集来的4～5粒完整的羊粪样置于研钵中，轻敲碾破成粒状，注意碾破过程中不要用力过大，尽量保持动物消化后牧草残渣纤维结构的原状和完整性；步骤2、尼龙袋包裹洗涤：将碾破的粪样用事先准备好的260目尼龙布包裹起来，扎紧，置于水龙头下，用自来水浸湿，然后将其放置在干净的培养皿中，加水使之完全淹没，浸泡10～15分钟；期间不断用玻璃棒轻轻拨动包裹粪样的尼龙布，使粪样中的可溶解物不断溶解滤出尼龙布；每2～3分钟换一次水；步骤3、培养皿静置洗涤：将步骤2中浸泡好的粪样取出，轻轻挤出多余污水；然后展开尼龙布，用装满水的注射器水流冲洗粘在尼龙布上的滤渣到培养皿中；继续给培养皿中加水，搅动，继续溶解残渣中杂质；此时细砂，泥土难溶颗粒物会逐步沉淀而草样残渣则漂浮于上面，静置2～3分钟，用不带针头注射器轻吸漂浮于培养皿表面的草样，重复2～3次；步骤4、高速水流冲洗：继续用不带针头注射器吸入除去细砂和泥土的牧草残渣和水，然后迅速将其重新推入培养皿中，反复多次，利用高速水流深度清洗粪样牧草残渣表面；步骤5、换水：将洗涤的牧草残渣用尼龙布过滤，滤去污水，培养皿重新加入干净水；重新用注射器冲洗粘在尼龙布上的牧草残渣到培养皿中；多次重复步骤4和步骤5，直至洗涤水澄清不再带有微黄色为止；最后一次换水时使用蒸馏水；步骤6、吸水干燥：用滤纸吸干培养皿中多余水分；盛有牧草残渣的培养皿室温下放置48小时，使其自然变干，并保证上样品台时完全干燥，集中残渣；步骤7、样品台准备：将导电双面胶带粘贴到样品台上，用指尖轻粘上述干燥好的残渣样品，保证黏贴面残渣均匀分布，没有重叠和损伤残渣，按顺序贴牢在胶带上；步骤8、样品喷金镀膜：新鲜样品自身就可导电，而经过干燥的生物样品不能导电；这种不导电的样品在SEM下观察时，会产生电荷积累而影响观察稳定性；干燥的样品用离子喷金仪msp‑1s需在样品表面喷一层金膜。