[发明专利]一种二肽基肽酶IV的荧光探针底物及制备方法及应用

摘要

本发明公开了一种二肽基肽酶IV的荧光探针底物及制备方法及应用，该荧光探针底物具有如下式的结构式：合成方法以下6‑氨基‑2‑萘甲酸为原料合成。采用所述的二肽基肽酶IV的荧光探针底物，与含二肽基肽酶IV的生物样品混合后进行酶促反应，通过定量检测单位时间内的底物消除率或其去二肽基产物的生成率来定量测定不同生物体系中DPP‑IV的活性。本发明的探针底物作为特异性的DPP‑IV单酶的荧光探针底物，该化合物可以用来检测DPP‑IV的活性。

主权项

1.一种二肽基肽酶IV的荧光探针底物用于快速筛选DPP‑IV抑制剂的应用，所述的探针底物具有式所述的结构式，R为甲基或乙基或丙基或丁基； 其特征在于：快速筛选方法如下：以GP‑ANC的水解代谢为探针反应，借助人肠微粒体体外孵育体系，测定所要筛选的抑制剂对DPP‑IV抑制的IC50：步骤如下：a. 200微升体外代谢反应体系中，含有pH为7.4的磷酸缓冲液，人肠微粒体蛋白浓度为10 μg/ml，抑制剂终浓度范围为0.01μM‑100μM，于37℃条件下震荡预孵10分钟；b. 向反应体系中加入底物，终浓度100μM，起始反应；于37℃条件下反应30分钟后，加入200 µl乙腈，剧烈震荡后，终止反应；c. 采用高速冷冻离心机，在20,000 ×g的条件下，高速离心上述体系5分钟后，取上清，进行酶标仪检测分析；对代谢水解产物进行定量检测。