[发明专利]一种坛紫菜纯系种苗培育方法

摘要

一种坛紫菜纯系种苗培育方法，涉及坛紫菜。将单株坛紫菜叶状体表面清洗后阴干，冷冻保存后取出，再静水弱光复苏培养；取营养组织块放置于葡萄糖溶液中浸泡，将营养组织块剪成小块，再放置于海螺酶溶液中酶解，观察细胞解离状况，当观察到藻体碎片游离出单细胞或多细胞团时，过滤细胞液，滤液离心后弃上清液保留沉淀，洗涤后重复离心；将收集到的细胞放入消毒海水中黑暗培养后，在1/2MES培养液继续培养，直至培养液恢复正常海水盐度后继续培养20～30d后，将丝状体吸出，即为纯系种质丝状体，再静水培养，进行保种，然后经一级扩增、二级扩增和三级扩增后得纯系自由丝状体；将纯系自由丝状体移植到贝壳进行种苗培育。

主权项

1.一种坛紫菜纯系种苗培育方法，其特征在于包括以下步骤：1)将单株坛紫菜叶状体表面清洗后阴干，冷冻保存，将冷冻后的单株坛紫菜叶状体取出，再次清洗后静水弱光复苏培养；2)取单株坛紫菜叶状体的营养组织块，放置于葡萄糖溶液中浸泡，然后将单株坛紫菜叶状体的营养组织块剪成小块，再放置于海螺酶溶液中酶解，酶解期间观察细胞解离状况，当在显微镜下观察到藻体碎片游离出单细胞或多细胞团时，过滤细胞液，滤液离心后弃上清液保留沉淀，洗涤后重复离心；所述酶解的酶液配方为：0.12g海螺酶+1.27g甘露醇+2.2mg无水CaCl₂+2.4mgMgSO₄+10ml盐度为37的消毒海水，pH6.0～6.2；酶解的条件为：黑暗振荡，温度为27℃，酶解时间为1～2h；所述酶解期间观察细胞解离状况是每隔30min观察细胞解离状况；所述过滤采用300目筛绢过滤；所述离心是在1500r/min下离心3min；所述洗涤用盐度37的消毒海水洗涤；所述重复离心的次数为2次；3)将收集到的细胞放入消毒海水中黑暗培养后，在1/2MES培养液继续培养，直至培养液恢复正常海水盐度后继续培养20～30d后，将丝状体吸出，即为纯系种质丝状体，再静水培养，进行保种；4)将步骤3)静水培养后的纯系种质丝状体经一级扩增、二级扩增和三级扩增后得到纯系自由丝状体；5)将步骤4)得到的纯系自由丝状体移植到贝壳进行种苗培育。