[发明专利]用于人乳头瘤病毒E6/E7基因检测的试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了用于人乳头瘤病毒E6/E7基因检测的试剂盒，试剂盒包括，22对针对22种不同亚型人乳头瘤病毒设计的上游引物及下游引物，各对上游引物及下游引物的其中一条修饰有荧光基团，每一对PCR引物都针对一种HPV E6/E7基因；本发明还公开用于人乳头瘤病毒E6/E7基因检测的方法，方法如下，PCR反应体系为10uL：DDH₂O 2.35uL，10*PCR Buffer 1uL，25nM Mg²⁺1uL，2nM DNTP 1.5uL，22对针对22种不同亚型人乳头瘤病毒设计的上游引物及下游引物混合物，5U/uL FastTaq酶0.15uL，反应模板3uL；PCR产物上遗传分析仪进行毛细管电泳及基因型分析，根据毛细管电泳图上特定颜色和位置的峰来判断HPV亚型，本发明方法采用Touchdown多重PCR技术能够有效降低多重PCR的非特异性扩增。

主权项

1.用于人乳头瘤病毒E6/E7基因检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括，22对针对22种不同亚型人乳头瘤病毒设计的上游引物及下游引物，分别为，针对人乳头瘤病毒6型的上游引物及下游引物、针对人乳头瘤病毒11型的上游引物及下游引物、针对人乳头瘤病毒16型的上游引物及下游引物、针对人乳头瘤病毒18型的上游引物及下游引物、针对人乳头瘤病毒31型的上游引物及下游引物、针对人乳头瘤病毒33型的上游引物及下游引物、针对人乳头瘤病毒35型的上游引物及下游引物、针对人乳头瘤病毒39型的上游引物及下游引物、针对人乳头瘤病毒44型的上游引物及下游引物、针对人乳头瘤病毒51型的上游引物及下游引物、针对人乳头瘤病毒52型的上游引物及下游引物、针对人乳头瘤病毒53型的上游引物及下游引物、针对人乳头瘤病毒56型的上游引物及下游引物、针对人乳头瘤病毒58型的上游引物及下游引物、针对人乳头瘤病毒59型的上游引物及下游引物、针对人乳头瘤病毒61型的上游引物及下游引物、针对人乳头瘤病毒66型的上游引物及下游引物、针对人乳头瘤病毒68型的上游引物及下游引物、针对人乳头瘤病毒73型的上游引物及下游引物、针对人乳头瘤病毒81型的上游引物及下游引物、针对人乳头瘤病毒82型的上游引物及下游引物、针对人乳头瘤病毒83型的上游引物及下游引物；其中所述6、11、16、18、31、33、35、39、44、51、52、53、56、58、59、61、66、68、73、81、82和83型的上游引物及下游引物序列分别为，6型上游引物如序列表中SEQ ID NO.1所示；6型下游引物如序列表中SEQ ID NO.2所示；11型上游引物如序列表中SEQ ID NO.3所示；11型下游引物如序列表中SEQ ID NO.4所示；16型上游引物如序列表中SEQ ID NO.5所示；16型下游引物如序列表中SEQ ID NO.6所示；18型上游引物如序列表中SEQ ID NO.7所示；18型下游引物如序列表中SEQ ID NO.8所示；31型上游引物如序列表中SEQ ID NO.9所示；31型下游引物如序列表中SEQ ID NO.10所示；33型上游引物如序列表中SEQ ID NO.11所示；33型下游引物如序列表中SEQ ID NO.12所示；35型上游引物如序列表中SEQ ID NO.13所示；35型下游引物如序列表中SEQ ID NO.14所示；39型上游引物如序列表中SEQ ID NO.15所示；39型下游引物如序列表中SEQ ID NO.16所示；44型上游引物如序列表中SEQ ID NO.17所示；44型下游引物如序列表中SEQ ID NO.18所示；51型上游引物如序列表中SEQ ID NO.19所示；51型下游引物如序列表中SEQ ID NO.20所示；52型上游引物如序列表中SEQ ID NO.21所示；52型下游引物如序列表中SEQ ID NO.22所示；53型上游引物如序列表中SEQ ID NO.23所示；53型下游引物如序列表中SEQ ID NO.24所示；56型上游引物如序列表中SEQ ID NO.25所示；56型下游引物如序列表中SEQ ID NO.26所示；58型上游引物如序列表中SEQ ID NO.27所示；58型下游引物如序列表中SEQ ID NO.28所示；59型上游引物如序列表中SEQ ID NO.29所示；59型下游引物如序列表中SEQ ID NO.30所示；61型上游引物如序列表中SEQ ID NO.31所示；61型下游引物如序列表中SEQ ID NO.32所示；66型上游引物如序列表中SEQ ID NO.33所示；66型下游引物如序列表中SEQ ID NO.34所示；68型上游引物如序列表中SEQ ID NO.35所示；68型下游引物如序列表中SEQ ID NO.36所示；73型上游引物如序列表中SEQ ID NO.37所示；73型下游引物如序列表中SEQ ID NO.38所示；81型上游引物如序列表中SEQ ID NO.39所示；81型下游引物如序列表中SEQ ID NO.40所示；82型上游引物如序列表中SEQ ID NO.41所示；82型下游引物如序列表中SEQ ID NO.42所示；83型上游引物如序列表中SEQ ID NO.43所示；83型下游引物如序列表中SEQ ID NO.44所示；所述6、11、16、18、31、33、35、39、44、51、52、53、56、58、59、61、66、68、73、81、82和83型的上游引物及下游引物其各对的上游引物或下游引物修饰有荧光基团，所述荧光基团修饰于引物5’端。