[发明专利]靶向HSP70基因RNA干扰重组慢病毒载体及其构建方法

摘要

本发明涉及靶向HSP70基因RNA干扰重组慢病毒载体的构建、筛选及其用途。本发明利用RNA干扰技术，针对HSP70基因的不同靶序列，构建了四个能在293细胞中表达siRNA的慢病毒真核表达载体，干扰慢病毒是由pLv‑HSP70shRNA、pMD2.G和pSPAX2载体共转染293T细胞培养获得。本发明靶向HSP70基因RNA干扰重组慢病毒载体能高效特异性的抑制HSP70基因表达，可用于制备治疗帕金森病或肿瘤相关性基因药物。

主权项

一种靶向HSP70基因的siRNA重组慢病毒表达载体，是用于帕金森病或肿瘤HSP70基因相关治疗性物质，干扰慢病毒是由pLv‑HSP70shRNA、pMD2.G和pSPAX2载体共转染293T细胞培养获得；其中，所述的pLv‑HSP70shRNA重组载体是在pLv‑shRNA载体的多克隆位点中连接双链DNA片段构建而得，酶切位点是BamHI和EcoRI；所述的双链DNA片段为以下序列中的一种：(1)HSP70‑homo‑S1寡核苷酸序列1:正义链:5’GATCCccACCATTGAGGAGGTAGATTCTCGAGAATCTACCTCCTCAATGGTGG TTTTTg3’反义链:5’aattcaaaaaccACCATTGAGGAGGTAGATT CTCGAG AATCTACCTCCTCAATGGTGGG3’(2) HSP70‑homo‑S2寡核苷酸序列2:正义链: GATCCgcCATGACGAAAGACAACAATCTCGAGATTGTTGTCTTTCGTCATGGC TTTTTg反义链: AATTCAAAAAGCCATGACGAAAGACAACAATCTCGAGATTGTTGTCTTTCGTCATGCG(3)HSP70‑homo‑S3寡核苷酸序列3:正义链: GATCCcgTGGAGGAGTTCAAGAGAAACTCGAGTTTCTCTTGAACTCCTCCACG TTTTTg反义链: AATTCAAAAACGTGGAGGAGTTCAAGAGAAACTCGAGTTTCTCTTGAACTCCTCCACGG(4)HSP70‑homo‑S4寡核苷酸序列4:正义链:GATCCgcTGACCAAGATGAAGGAGATCTCGAGATCTCCTTCATCTTGGTCAGC TTTTTg反义链: AATTCAAAAAGCTGACCAAGATGAAGGAGATCTCGAGATCTCCTTCATCTTGGTCAGCG。