[发明专利]一种用BccI鉴定人乳腺癌RAD51基因rs7180135多态性的方法

摘要

本发明公开了一种用BccI鉴定人乳腺癌RAD51基因rs7180135多态性的方法，采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法，是采用聚合酶链式反应扩增目的DNA片段，然后将待检测的DNA片段用限制性内切酶酶切，限制性内切酶识别并切割特异的序列，然后将酶切后的产物进行电泳，再由限制酶图谱分析此段序列的特异切位点，藉由片段的多样性来比对不同来源基因序列的差异性。简而言之，就是先PCR扩增相应目的片断，而后进行限制性内切酶切反应，电泳后观察比较限制性图谱来分析序列之间的差异。此方法重复性好，操作较简单，成本低，酶切结果容易辨识。因此，本发明的目的是提供一种操作简单、成本低、适用范围广泛的检测人乳腺癌易感基因RAD51rs7180135多态性的方法及检测试剂盒。

主权项

一种用BccI鉴定人乳腺癌RAD51基因rs7180135多态性的方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)抽提样品的基因组DNA；(b)提供扩增人RAD51基因rs7180135多态性位点附近序列的正向引物和反向引物，rs7180135上游引物:5’‑GTCTGTCTGAATGATCTTGTG‑3’，rs7180135下游引物:5’‑GCAACTTCCACCTTCCAG‑3’，以步骤(a)提取的待测人基因组DNA为模板，进行PCR扩增，获取扩增产物；(c)使用限制性内切酶对步骤(b)中获取的扩增产物进行酶切，获取相应的酶切产物；(d)将酶切产物采用3％的琼脂糖凝胶进行电泳，以判定RAD51基因rs7180135多态性的各基因型，其中，经电泳后有两条条带者为GG基因型，三条条带者为AA基因型，四条条带者为AG基因型。