[发明专利]鸡传染性支气管炎病毒nsp5 ELISA抗体检测试剂盒及其应用

摘要

本发明涉及免疫学检测方法领域，旨在提供一种鸡传染性支气管炎病毒nsp5 ELISA抗体检测试剂盒及其应用。该试剂盒包括：由重组表达的IBV非结构蛋白5包被的96孔酶联反应板、用样品稀释液稀释的IgG酶标抗体溶液、封闭液、洗涤液、样品稀释液、阳性对照样品、阴性对照样品、显色液和终止液。本发明以非结构蛋白nsp5作为包被抗原，可提供具有与进口商品化试剂盒高符合率的特性，而且成本大大降低。这是业内首次用IBV非结构蛋白作为抗原组装的ELISA抗体检测试剂盒。本试剂盒的使用具有方便快捷、敏感性高、特异性强等优点，为临床上IBV大规模抗体监测、流行病学调查以及IB的防控提供了一种新的有效的检测手段。

主权项

鸡传染性支气管炎病毒nsp5 ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：(1)由重组表达的IBV非结构蛋白5包被的96孔酶联反应板；(2)用样品稀释液稀释的IgG酶标抗体溶液，所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的羊抗鸡IgG抗体；(3)封闭液：含10％犊牛血清的PBS；(4)洗涤液：含0.05％Tween‑20的PBS；(5)样品稀释液：含5％脱脂奶的PBST；(6)阳性对照样品：抗IBV nsp5鸡血清；(7)阴性对照样品：阴性SPF鸡血清；(8)显色液：A液为底物溶液，含0.1mg/ml四甲基联苯胺溶液，B液为0.05％H₂O₂，使用前将A液和B液1:1混合；(9)终止液：2M H₂SO₄；所述重组表达的IBV非结构蛋白5通过下述方法制备获得：IBV nsp5的基因经RT‑PCR方法扩增获得后，将其克隆到原核表达载体pEGX‑4T‑1中，转化大肠杆菌；筛选携带IBV nsp5基因的重组菌，在IPTG诱导下大量表达与GST融合的nsp5重组蛋白；利用GSTrap FF亲和层析柱纯化，获得提纯后的IBV nsp5重组蛋白，保存于‑20℃备用；所述IBV nsp5的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；IBV nsp5的基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。