[发明专利]转CHI基因提高青蒿中青蒿素含量的方法

摘要

本发明是一种生物技术领域的转CHI基因提高青蒿中青蒿素含量的方法。本发明从青蒿中克隆查尔酮异构酶CHI基因，构建含CHI基因的植物表达载体，用根癌农杆菌介导，将CHI基因转入青蒿并再生出植株，PCR检测外源目的基因CHI的整合情况，高效液相色谱法及蒸发光散射检测器测定(HPLC‑ELSD)转基因青蒿中青蒿素的含量，筛选获得青蒿素含量提高的转基因青蒿植株。本发明获得的转基因青蒿中青蒿素含量有所提升，最高达到非转化对照植株的1.5倍，从而提供了一种提高青蒿中青蒿素含量的方法，为利用转基因青蒿大规模生产青蒿素打下了基础。

主权项

1.一种转CHI基因提高青蒿中青蒿素含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采用基因克隆方法获得CHI基因；(2)把所述CHI基因连接于表达调控序列，构建含CHI基因的植物表达载体；(3)将所述含CHI基因的植物表达载体转化根癌农杆菌，获得含所述CHI基因植物表达载体的根癌农杆菌菌株；(4)利用所述含CHI基因植物表达载体的根癌农杆菌菌株转化青蒿，获得经PCR检测的整合外源目的基因CHI的转基因青蒿植株；其中，所述CHI基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示；所述CHI基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；在所述步骤(1)中，所述基因克隆方法包括以下步骤：提取青蒿基因组总RNA，将所获的青蒿基因组总RNA通过反转录酶XL反转录获得第一链cDNA，根据SEQ ID NO.1所示的DNA序列，设计扩增出完整编码框的上游引物和下游引物，所述上游引物为SEQ ID NO.2所示的DNA序列，所述下游引物为SEQ ID NO.3所示的DNA序列，并在所述上游和下游引物上分别引入限制性内切酶位点以便构建表达载体，以所述的第一链cDNA为模板，以所述上游引物和所述下游引物为引物对，经PCR扩增后进行测序。