[发明专利]一种转基因植物非预期效应的分析方法

摘要

本发明涉及基因工程技术领域，提供了一种转基因植物非预期效应的分析方法，首次将亚硫酸氢盐测序技术用于分析转基因植物中与被转化外源基因同源性不高的内源基因的甲基化状态，进而研究转基因植物的非预期效应，建立了分析转基因植物是否具有非预期效应的技术体系，有助于转基因植物的监测和推广使用，具有重要的经济效益和社会效益。

主权项

一种转基因植物非预期效应的分析方法，其特征在于：具体步骤如下：(1)、基因组DNA的提取和亚硫酸氢盐处理分别提取转基因植株以及受体植株的基因组DNA，对基因组DNA进行亚硫酸氢盐处理；(2)、PCR扩增产物的克隆、测序及甲基化水平分析选择致敏蛋白基因、毒素物质合成的关键酶基因以及其他与代谢相关的主要的内源基因，对其启动子和编码区的CpG岛进行引物设计；以亚硫酸氢盐处理的基因组DNA为模板，进行PCR扩增；克隆PCR扩增产物，进行测序后，计算PCR扩增产物的甲基化水平,分析转基因植株中是否具有非预期效应；(3)、内源基因的荧光定量PCR分析对转基因植株中甲基化水平显著降低的内源基因，利用荧光定量PCR技术，测定其表达水平变化，验证转基因植株中是否具有非预期效应。