[发明专利]一种筛选对牛病毒性腹泻/黏膜病毒敏感的MDBK细胞系的方法有效
| 申请号： | 201610136832.5 | 申请日： | 2016-03-10 |
| 公开（公告）号： | CN105734007B | 公开（公告）日： | 2019-06-07 |
| 发明（设计）人： | 商晓桂;孔彩萍;韩志玲;郝鹏;羡东堡;田志辉;王云凌;范秀丽;刘国英;魏学峰 | 申请（专利权）人： | 金宇保灵生物药品有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京尚诚知识产权代理有限公司 11322 | 代理人： | 鲁兵 |
| 地址： | 010030 内蒙古*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种筛选对牛病毒性腹泻/黏膜病毒敏感的MDBK细胞系的方法。先对MDBK细胞进行单克隆，然后接种两种生物型(致细胞病变型和非致细胞病变型)的牛病毒性腹泻/黏膜病毒，最后用间接免疫荧光技术测定病毒滴度，确定病毒滴度高于106TCID50/mL的为对牛病毒性腹泻/黏膜病毒敏感的MDBK细胞系。本发明筛选的MDBK细胞系对两种生物型的牛病毒性腹泻/黏膜病毒均敏感，可直接应用于牛病毒性腹泻/黏膜病疫苗的研究和生产。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 筛选 病毒性 腹泻 黏膜 病毒 敏感 mdbk 细胞系 方法 | ||
【主权项】：
1.一种筛选对牛病毒性腹泻/黏膜病毒敏感的MDBK细胞系的方法，先对MDBK细胞进行单克隆，然后接种致细胞病变型和非致细胞病变型两种生物型的牛病毒性腹泻/黏膜病毒，最后用间接免疫荧光技术测定病毒滴度，确定病毒滴度高于106TCID50/mL的为对牛病毒性腹泻/黏膜病毒敏感的MDBK细胞系；对MDBK细胞进行单克隆包括以下步骤：用含体积浓度10％胎牛血清的MEM培养基将无外源病毒污染的MDBK细胞培养至铺满细胞培养瓶瓶底，用质量体积浓度0.25％的胰蛋白酶液消化成单个散在细胞，用含体积浓度10％胎牛血清的MEM培养基在96孔板培养单个散在细胞，标记只含有一个细胞的孔，待细胞数量增加后，再扩大培养，得到MDBK单克隆细胞。
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