[发明专利]检测F8基因突变的扩增引物、试剂盒及方法

摘要

本发明公开了一种检测F8基因突变的扩增引物、试剂盒及方法，本发明属于基因检测技术，扩增引物利用F8基因的序列信息设计65对PCR引物，通过PCR靶向扩增F8基因目标区域，扩增区域覆盖F8基因外显子编码区的99.5%。所述方法将多重PCR靶向扩增结合Ion torrent PGM高通量测序技术，实现多个样品的同时并行检测，提高了F8基因突变的检测范围和通量，缩短了检测周期，降低成本。

主权项

1.用于多重PCR特异性扩增检测F8基因突变的引物组，其特征在于，所述PCR引物共65对，分别如下：用于扩增F8基因外显子1和内含子1的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 1所示，反向引物如SEQ ID NO: 2所示；用于扩增F8基因内含子1到外显子2的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 3所示，反向引物如SEQ ID NO: 4所示；用于扩增F8基因外显子2到内含子2的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 5所示，反向引物如SEQ ID NO: 6所示；用于扩增F8基因内含子2到内含子3的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 7所示，反向引物如SEQ ID NO: 8所示；用于扩增F8基因内含子3到外显子4的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 9所示，反向引物如SEQ ID NO: 10所示；用于扩增F8基因外显子4到内含子4的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 11所示，反向引物如SEQ ID NO: 12所示；用于扩增F8基因内含子4到内含子5的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 13所示，反向引物如SEQ ID NO: 14所示；用于扩增F8基因内含子5到内含子6的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 15所示，反向引物如SEQ ID NO: 16所示；用于扩增F8基因内含子6到外显子7的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 17所示，反向引物如SEQ ID NO: 18所示；用于扩增F8基因外显子7到内含子7的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 19所示，反向引物如SEQ ID NO: 20所示；用于扩增F8基因内含子7到外显子8的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 21所示，反向引物如SEQ ID NO: 22所示；用于扩增F8基因外显子8到内含子8的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 23所示，反向引物如SEQ ID NO: 24所示；用于扩增F8基因内含子8到外显子9的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 25所示，反向引物如SEQ ID NO: 26所示；用于扩增F8基因外显子9到内含子9的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 27所示，反向引物如SEQ ID NO: 28所示；用于扩增F8基因内含子9到外显子10的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 29所示，反向引物如SEQ ID NO: 30所示；用于扩增F8基因内含子10到外显子11的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 31所示，反向引物如SEQ ID NO: 32所示；用于扩增F8基因外显子11到内含子11的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 33所示，反向引物如SEQ ID NO: 34所示；用于扩增F8基因内含子11到内含子12的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 35所示，反向引物如SEQ ID NO: 36所示；用于扩增F8基因外显子12到内含子12的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 37所示，反向引物如SEQ ID NO: 38所示；用于扩增F8基因内含子12到外显子13的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 39所示，反向引物如SEQ ID NO: 40所示；用于扩增F8基因外显子13到内含子13的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 41所示，反向引物如SEQ ID NO: 42所示；用于扩增F8基因内含子13到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 43所示，反向引物如SEQ ID NO: 44所示；用于扩增F8基因外显子14到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 45所示，反向引物如SEQ ID NO: 46所示；用于扩增F8基因外显子14到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 47所示，反向引物如SEQ ID NO: 48所示；用于扩增F8基因外显子14到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 49所示，反向引物如SEQ ID NO: 50所示；用于扩增F8基因外显子14到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 51所示，反向引物如SEQ ID NO: 52所示；用于扩增F8基因外显子14到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 53所示，反向引物如SEQ ID NO: 54所示；用于扩增F8基因外显子14到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 55所示，反向引物如SEQ ID NO: 56所示；用于扩增F8基因外显子14到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 57所示，反向引物如SEQ ID NO: 58所示；用于扩增F8基因外显子14到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 59所示，反向引物如SEQ ID NO: 60所示；用于扩增F8基因外显子14到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 61所示，反向引物如SEQ ID NO: 62所示；用于扩增F8基因外显子14到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 63所示，反向引物如SEQ ID NO: 64所示；用于扩增F8基因外显子14到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 65所示，反向引物如SEQ ID NO: 66所示；用于扩增F8基因外显子14到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 67所示，反向引物如SEQ ID NO: 68所示；用于扩增F8基因外显子14到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 69所示，反向引物如SEQ ID NO: 70所示；用于扩增F8基因外显子14到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 71所示，反向引物如SEQ ID NO: 72所示；用于扩增F8基因外显子14到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 73所示，反向引物如SEQ ID NO: 74所示；用于扩增F8基因外显子14到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 75所示，反向引物如SEQ ID NO: 76所示；用于扩增F8基因外显子14到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 77所示，反向引物如SEQ ID NO: 78所示；用于扩增F8基因外显子14到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 79所示，反向引物如SEQ ID NO: 80所示；用于扩增F8基因外显子14到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 81所示，反向引物如SEQ ID NO: 82所示；用于扩增F8基因外显子14到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 83所示，反向引物如SEQ ID NO: 84所示；用于扩增F8基因外显子14到外显子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 85所示，反向引物如SEQ ID NO: 86所示；用于扩增F8基因外显子14到内含子14的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 87所示，反向引物如SEQ ID NO: 88所示；用于扩增F8基因内含子14到外显子15的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 89所示，反向引物如SEQ ID NO: 90所示；用于扩增F8基因外显子15到内含子15的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 91所示，反向引物如SEQ ID NO: 92所示；用于扩增F8基因内含子15到外显子16的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 93所示，反向引物如SEQ ID NO: 94所示；用于扩增F8基因外显子16到内含子16的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 95所示，反向引物如SEQ ID NO: 96所示；用于扩增F8基因内含子16到外显子17的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 97所示，反向引物如SEQ ID NO: 98所示；用于扩增F8基因外显子17到内含子17的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 99所示，反向引物如SEQ ID NO: 100所示；用于扩增F8基因内含子17到内含子18的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 101所示，反向引物如SEQ ID NO: 102所示；用于扩增F8基因内含子18到内含子19的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 103所示，反向引物如SEQ ID NO: 104所示；用于扩增F8基因外显子19到内含子19的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 105所示，反向引物如SEQ ID NO: 106所示；用于扩增F8基因内含子19到内含子20的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 107所示，反向引物如SEQ ID NO: 108所示；用于扩增F8基因内含子20到内含子21的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 109所示，反向引物如SEQ ID NO: 110所示；用于扩增F8基因内含子21到外显子22的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 111所示，反向引物如SEQ ID NO: 112所示；用于扩增F8基因外显子22到内含子22的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 113所示，反向引物如SEQ ID NO: 114所示；用于扩增F8基因内含子22到外显子23的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 115所示，反向引物如SEQ ID NO: 116所示；用于扩增F8基因外显子23到内含子23的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 117所示，反向引物如SEQ ID NO: 118所示；用于扩增F8基因内含子23到外显子24的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 119所示，反向引物如SEQ ID NO: 120所示；用于扩增F8基因外显子24到内含子24的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 121所示，反向引物如SEQ ID NO: 122所示；用于扩增F8基因内含子24到内含子25的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 123所示，反向引物如SEQ ID NO: 124所示；用于扩增F8基因外显子25到内含子25的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 125所示，反向引物如SEQ ID NO: 126所示；用于扩增F8基因内含子25到外显子26的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 127所示，反向引物如SEQ ID NO: 128所示；用于扩增F8基因外显子26到外显子26的引物，其正向引物如SEQ ID NO: 129所示，反向引物如SEQ ID NO: 130所示。