[发明专利]凝血因子XIII的制备方法

摘要

本发明提供一种得率高、纯度高且生产周期短的凝血因子XIII的制备方法，包括血浆血球分离、病毒灭活、硫酸铵分级沉淀、DEAE‑FF层析柱、分装和冻干步骤，其中病毒灭活时加入助剂，在0～4℃环境下进行凝血因子XIII的分级沉降、溶解过程，加入不同的溶解剂对沉淀进行分级溶解，提高溶解效率，缩短生产周期，减少细菌滋生，提高凝血因子XIII得率和纯度。本发明提供的凝血因子XIII的制备方法的有益效果在于：提取效率高，每升血浆能提取10毫克以上的凝血因子XIII；制得的凝血因子XIII冻干制品中，凝血因子XIII纯度在90％以上；操作简单，生产周期短，在2天时间内即可完成凝血因子XIII的制备。

主权项

1.凝血因子XIII的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、向血液中加入抗凝剂后离心分离，取上清抗凝血浆；步骤2、向上清抗凝血浆中加入磷酸三丁酯和吐温‑80作为病毒灭活剂，并加入助剂，进行S/D病毒灭活，得灭活后的血浆；步骤3、将灭活后的血浆离心，取清液；步骤4、将步骤3所得清液预冷至0～4℃，加入0～4℃的饱和硫酸铵溶液后，取沉淀；步骤5、将步骤4所得沉淀用0～4℃的饱和硫酸铵溶液洗涤，将洗涤后的沉淀破碎并加入0～4℃的一次溶解剂并搅拌，取清液，所述一次溶解剂为氯化钾溶液；步骤6、将步骤5所得清液预冷至0～4℃，加入0～4℃的乙酸体积分数为94％～96％的乙酸溶液至溶液pH为5.2～6.5后，加入硫酸铵固体至溶液饱和度为15％～20％，取沉淀；步骤7、向步骤6所得沉淀中加入0～4℃的二次溶解剂并搅拌，取清液，所述二次溶解剂为含有氯化钠的缓冲液，所述二次溶解剂中的缓冲对为Tris‑HCl、磷酸氢二钠‑磷酸二氢钠和柠檬酸盐‑磷酸盐中的任一种；步骤8、将步骤7所得清液水浴加热至53～56℃，维持160～200秒后冷却至0～4℃，取清液；步骤9、向步骤8所得清液中加入硫酸铵固体至溶液饱和度为35％～40％，取沉淀；步骤10、向步骤9所得沉淀中加入0～4℃的三次溶解剂并搅拌，取清液，所述三次溶解剂为含有氯化钾的Tris‑HCl缓冲液；步骤11、将步骤10所得清液梯度洗脱后冷冻干燥，即得凝血因子XIII冻干制品；所述一次溶解剂中氯化钾的浓度为0.1～0.2mol/L；所述二次溶解剂中氯化钠的浓度为0.1～0.2mol/L，缓冲对的浓度为0.01～0.05mol/L，所述二次溶解剂的pH值为7.0～7.5；步骤2中的助剂为0.2mol/L的葡萄糖。