[发明专利]一种发酵生产两性霉素B的方法

摘要

本发明属于发酵工程领域，具体涉及一种提高微生物发酵生产两性霉素B产量的方法。该方法通过优化有机复合氮源和发酵条件，降低不同批次间氮源对发酵代谢的影响；通过添加前体物质，促进两性霉素B生物合成。发酵结束后，两性霉素B的发酵单位达到14469ug/ml。与优化前相比，两性霉素B产量提高103%，发酵时间缩短14%，提高了设备利用率，同时易于下游的纯化。

主权项

1.一种发酵生产两性霉素B的方法，包括以下步骤：a. 制备结节性链霉素菌株（Streptomyces nodosus）的种子液将结节性链霉素菌株的斜面培养物或孢子液接种于种子培养基，26‑30℃、在摇瓶或发酵罐中培养44‑52 h获得种子液；其中所述的种子培养基按以下方法制得：玉米淀粉20.0‑30.0克、葡萄糖10.0‑20.0克、热榨黄豆饼粉10.0‑20.0克、酵母粉5.0‑10.0克、玉米浆2.0‑8.0克、氯化钠1.0‑2.0克、碳酸钙3.0‑4.0克，加水定容至1000mL，pH7.0‑7.5，121℃灭菌30min；b. 制备结节性链霉素菌株（Streptomyces nodosus）的发酵液将上述种子液以体积百分比6‑15 %的接种量接种于发酵培养基，在摇瓶或发酵罐中发酵，发酵24‑50小时之间加入前体物质丙酸钠或正丙醇，继续发酵，总发酵时间120‑140 h，发酵温度26 ‑30 ℃，得到发酵液；其中所述发酵培养基按以下方法制得：葡萄糖20.0‑40.0克、玉米粉20.0‑30.0克、热榨黄豆饼粉0‑20.0克、棉籽饼粉0‑30.0克、酵母粉0‑10.0克、玉米浆5.0‑8.0克、磷酸二氢钾0.5‑0.8克、氯化钠1.0‑2.0克、碳酸钙3.0‑6.0克，加水定容至1000mL，pH7.0‑8.0，121℃灭菌30min；其中步骤a中所述结节性链霉素菌株为ATCC14899；其中步骤b中前体物质丙酸钠添加量为每升发酵液加入0.4‑2克，正丙醇添加量为每升发酵液加入3‑4克；其中步骤b中热榨黄豆饼粉、棉籽饼粉、酵母粉的量不同时为0。