[发明专利]用于生物技术制备甲基化的肉桂酸和肉桂酸酯、甲基化的苯乙胺和其偶联产物、尤其肉桂酸酰胺的偶联产物的方法

摘要

本发明涉及提供用于利用4′‑O‑甲基转移酶以及必要时与其他酶结合来来制备3,4‑甲基化的肉桂酸、3,4‑甲基化的肉桂酸酯、3,4‑二甲氧基苯乙胺和4‑甲基肉桂酸酰胺的发酵和生物技术方法，其中酶借助于代谢工程选择并且必要时所述酶通过有针对性的优化来调整，以及涉及组合物，所述组合物通过所述方法获得。此外，本发明涉及载体体系、重组的微生物或真菌，以及特定的核酸片段和多肽。

主权项

一种利用重组的微生物或真菌来制备3,4‑甲基化的肉桂酸或3,4‑甲基化的肉桂酸酯的方法，所述方法包括下列步骤：(i)提供重组的微生物或真菌，所述重组的微生物或真菌包含‑(a1)核酸片段，所述核酸片段包括至少一种编码4′‑O‑甲基转移酶的基因或由其构成，和‑(a2)可选的核酸片段，所述核酸片段包括至少一种编码3′‑O‑甲基转移酶的基因或由其构成，和‑(b)可选的用于发酵制备的核酸片段，所述核酸片段包括用于编码S‑腺苷甲硫氨酸合成酶的基因或由其构成；(ii)在允许核酸片段表达的条件下培养重组的微生物或真菌来获得相应的表达产物；(iii)可选地分离以及必要时纯化获得的表达产物；(iv)将一种或多种羟基肉桂酸、优选咖啡酸或阿魏酸，可选地以在半纤维素上酯化的方式，添加至根据步骤(ii)的培养的重组的微生物或真菌以用于发酵反应或添加至根据步骤(iii)的表达产物以用于酶促反应，和/或将一种或多种羟基肉桂酸的前体或一种或多种羟基肉桂酸的衍生物、尤其咖啡酸或阿魏酸的前体或衍生物，可选地以在半纤维素上酯化的方式，添加至根据步骤(ii)的培养的重组的微生物或真菌以用于发酵反应或添加至将根据步骤(iii)的表达产物以用于酶促反应；(v)并且在实现将羟基肉桂酸或其一种或多种前体或其衍生物反应成3,4‑甲基化的肉桂酸或3,4‑甲基化的肉桂酸酯的条件下培养或孵育重组的微生物或真菌或表达产物以获得相应的3,4‑甲基化的肉桂酸或3,4‑甲基化的肉桂酸酯；(vi)可选地分离以及必要时纯化获得的3,4‑甲基化的肉桂酸或3,4‑甲基化的肉桂酸酯以及可选地分离以及必要时纯化可能存在的其他副产物。