[发明专利]一种适于牙鲆性腺冰冻切片mRNA原位杂交的方法在审
| 申请号： | 201610082004.8 | 申请日： | 2016-02-05 |
| 公开（公告）号： | CN105648065A | 公开（公告）日： | 2016-06-08 |
| 发明（设计）人： | 焦爽;范兆飞;谭训刚;尤锋 | 申请（专利权）人： | 中国科学院海洋研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 李颖;周秀梅 |
| 地址： | 266071*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及mRNA原位杂交技术，具体的说是一种适于牙鲆性腺冰冻切片mRNA原位杂交的方法。将牙鲆性腺依次经过量浓度为4％PFA溶液固定和100％甲醇溶液通透，而后长期保存；固定后保存的样品经复水、20-30％蔗糖沉降后，进行OCT包埋和冰冻切片，55℃干燥2-3h，获得冰冻切片作为原位杂交样品；上述样品经过量DEPC水洗涤3-5min以除去样品切片OCT包埋剂；洗涤、蛋白酶K消化、固定而后经预杂交，预杂交后与含有牙鲆RNA探针的杂交液混合于50-70℃下杂交过夜；杂交处理后洗涤，并经抗体孵育，再洗涤，避光显色，终止显色，再固定，封片，进而实现对牙鲆性腺相关基因在mRNA水平的表达定位。本发明解决了牙鲆性腺组织难于直接进行性腺原位杂交的问题，能够清晰地描述牙鲆相关基因在性腺中的表达定位(mRNA水平)。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 适于 性腺 冰冻 切片 mrna 原位杂交 方法 | ||
【主权项】：
一种适于牙鲆性腺冰冻切片mRNA原位杂交的方法，其特征在于：1)将牙鲆性腺依次经过量浓度为4％PFA溶液固定和100％甲醇溶液通透，而后长期保存；固定后保存的样品经复水、20‑30％蔗糖沉降后，进行OCT包埋和冰冻切片，55℃干燥2‑3h，获得冰冻切片作为原位杂交样品；2)上述样品经过量DEPC水洗涤3‑5min以除去样品切片OCT包埋剂；洗涤、蛋白酶K消化、固定而后经预杂交，预杂交后与含有牙鲆RNA探针的杂交液混合于50‑70℃下杂交过夜；杂交处理后洗涤，并经抗体孵育，再洗涤，避光显色，终止显色，再固定，封片，进而实现对牙鲆性腺相关基因在mRNA水平的表达定位。
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