[发明专利]转基因牡丹愈伤组织的GUS基因组织化学染色方法

摘要

本发明公开一种转基因牡丹愈伤组织的GUS基因组织化学染色方法，将转基因牡丹愈伤组织从培养基中取出，用蒸馏水洗去残留菌体，放入离心管中，加入Buffer A至没过愈伤组织，置于24℃环境中，侵泡1 h，用移液枪将Buffer A吸出，加入Buffer B至没过愈伤组织，置于24℃黑暗环境中染色过夜或数小时，至愈伤组织出现蓝色。本发明将原GUS基因组织化学染色方法中的37℃优化为24℃。将试验筛选得到的增殖生长良好的愈伤组织进行GUS组织化学染色的检测，试验结果成功检测到GUS活性的表达，愈伤组织碎块呈蓝色，表明新生的愈伤组织中存在GUS活性位点。

主权项

1.一种转基因牡丹愈伤组织的GUS基因组织化学染色方法，其特征在于：将转基因牡丹愈伤组织从培养基中取出，用蒸馏水洗去残留菌体，放入离心管中，加入Buffer A至没过愈伤组织，置于24℃环境中，侵泡1h，用移液枪将Buffer A吸出，加入Buffer B至没过愈伤组织，置于24℃黑暗环境中染色过夜或数小时，至愈伤组织出现蓝色；Buffer A成分如下：其中0.2M NaPO₄buffer溶液由0.2M Na₂HPO₄和0.2M NaH₂PO₄混合配制而成，每100ml的0.2M NaPO₄buffer溶液由62ml 0.2M Na₂HPO₄和38ml 0.2M NaH₂PO₄混合而成，Buffer A置于4℃保存；Buffer B由Buffer A和X‑gluc混合配制而成，X‑gluc的浓度为1mg/ml，Buffer B置于‑20℃，避光保存。