[发明专利]利用交联蛋白质晶体作籽晶提高蛋白质结晶成功率的方法有效
| 申请号： | 201610004553.3 | 申请日： | 2016-01-06 |
| 公开（公告）号： | CN105566443B | 公开（公告）日： | 2019-06-04 |
| 发明（设计）人： | 尹大川;闫二开;张辰艳;刘雅丽;周仁斌;陈达;刘悦;李嘉欣 | 申请（专利权）人： | 西北工业大学 |
| 主分类号： | C07K1/30 | 分类号： | C07K1/30 |
| 代理公司： | 西北工业大学专利中心 61204 | 代理人： | 顾潮琪 |
| 地址： | 710072 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种利用交联蛋白质晶体作籽晶提高蛋白质结晶成功率的方法，首先生长蛋白质晶体，并对蛋白质晶体进行化学交联，将得到的交联蛋白质晶体溶于超纯水中，制得籽晶溶液；然后将籽晶溶液滴入结晶板的坐滴孔，自然晾干结晶板；最后利用筛选试剂盒对蛋白质进行结晶条件筛选，利用自动拍照系统观察蛋白质晶体的形貌，并统计蛋白质晶体的结晶条件数；收集并衍射蛋白质晶体，获取衍射数据。本发明选取交联蛋白质晶体作为籽晶，可以在空气中稳定存在，利于长期存储，并且可以重复利用；本发明可以有效地提高蛋白质结晶条件筛选的成功率。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 交联 蛋白质 晶体 籽晶 提高 结晶 成功率 方法 | ||
【主权项】：
1.一种利用交联蛋白质晶体作籽晶提高蛋白质结晶成功率的方法，其特征在于包括下述步骤：第一步，生长蛋白质晶体，并对蛋白质晶体进行化学交联，将得到的交联蛋白质晶体溶于超纯水中，浓度均为5‑20mg/ml，制得籽晶溶液；第二步，在结晶板的每个坐滴孔中滴入0.5‑2μl的籽晶溶液，自然晾干结晶板；第三步，利用筛选试剂盒对蛋白质进行结晶条件筛选，首先制备蛋白质溶液；然后向结晶板的每个深孔中加入80μl的池液，将筛选结晶剂和蛋白质溶液按照1：1的质量比混合得到结晶溶液，将2μl的结晶液滴滴入结晶板的坐滴孔，密封结晶板，并在277‑293K的结晶温度下结晶3‑7天；第四步，观察蛋白质晶体的形貌，统计蛋白质晶体的结晶条件数；收集并衍射蛋白质晶体，获取衍射数据。
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