[发明专利]一种H7N9亚型禽流感病毒检测试剂盒及其使用方法

摘要

本发明属于生物技术领域，涉及一种H7N9亚型禽流感病毒PCR-ELISA检测试剂盒及使用方法。检测试剂盒由RT-PCR反应体系、ELISA检测体系、3个靶基因(甲型流感病毒M基因、H7N9亚型病毒HA基因和H7N9亚型病毒NA)阳性质粒(pMD-M、Pmd-H7和Pmd-N9)、阴性质控品和3个靶基因的特异性引物探针组成。用这3组生物素标记的特异性引物，通过RT-PCR进行特异性扩增，扩增产物变性后与地高辛标记的特异性探针杂交，杂交产物包被链霉亲和素包被的96孔微板，加入辣根过氧化物酶标记的抗地高辛抗体通过ELISA法进行检测。本发明涉及3组特异性引物探针在环境标本鉴别诊断和H7N9亚型禽流感病毒分离株分型鉴定中的用途。

主权项

一种基于RT‑PCR‑ELISA的H7N9亚型流感病毒分型检测试剂盒，其特征是试剂盒的组成部分为AMV反转录体系、PCR反应体系、阳性质控品、阴性质控品和3种H7N9亚型流感病毒靶基因特异性引物探针，3种流感病毒靶基因特异性引物探针名称和序列分别是：M‑F ttctaaccgaggtcgaaacgtatgt、M‑R BIO‑acggtgagcgtgaaaacaaaccc、M‑P DIG–tcaggccccctcaaagccgagat、H7‑F caaataacaggaaaattaaaccggc、H7‑R BIO‑ccccgaagctaaaccaaagtatcac、H7‑P DIG–gagagagaatgctgaagaagatggc、N9‑F cacttcagccactgctatcataa、N9‑R BIO‑attgttccgtttgagtgtttccct和N9‑P DIG–tgggaaagacaatgcagtaagaa。