[发明专利]基于气相色谱-质谱联用技术和形态的山羊转基因克隆胚胎质量评估差异代谢物的筛选方法在审
| 申请号： | 201510571809.4 | 申请日： | 2015-09-09 |
| 公开（公告）号： | CN105112491A | 公开（公告）日： | 2015-12-02 |
| 发明（设计）人： | 张艳丽;张国敏;万永杰;王锋 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/02 | 分类号： | C12Q1/02;C12N5/073;G01N30/02 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 徐冬涛;李晓峰 |
| 地址： | 211225 江苏省南京市溧*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开一种基于气相色谱-质谱联用技术和形态的山羊转基因克隆胚胎质量评估差异代谢物的筛选方法，包括以下步骤：(1)重构胚培养48h时，检查卵裂率，并依据形态将卵裂的胚胎分为高质量卵裂胚胎组和低质量卵裂胚胎组，随机将各组胚胎分组放入囊胚培养滴中继续培养；(2)第7.5d统计囊胚率并分别收集高质量卵裂胚胎组和低质量卵裂胚胎组的囊胚和胚胎代谢液；(3)对收集的胚胎代谢液样品进行处理，并进行气相色谱-质谱检测；(4)对检测结果进行统计分析。本发明结合胚胎的形态评估，找出与山羊转基因克隆胚胎质量密切相关的代谢标记物，为寻找预测胚胎发育潜能的研究提供了参考，有助于筛选出优质的移植胚胎和提高转基因克隆的效率。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 色谱 联用 技术 形态 山羊 转基因 克隆 胚胎 质量 评估 差异 代谢物 筛选 方法 | ||
【主权项】：
一种基于气相色谱‑质谱联用技术和形态的山羊转基因克隆胚胎质量评估差异代谢物的筛选方法，其特征在于包括以下步骤：(1)重构胚培养48h时，检查卵裂率，并依据形态将卵裂的胚胎分为高质量卵裂胚胎组和低质量卵裂胚胎组，随机将各组胚胎分组放入囊胚培养滴中继续培养；(2)第7.5d统计囊胚率并分别收集高质量卵裂胚胎组和低质量卵裂胚胎组的囊胚和胚胎代谢液；(3)对收集的胚胎代谢液样品进行处理，并以囊胚培养液作为空白对照进行气相色谱‑质谱检测；(4)对检测结果进行统计分析：用SIMCA‑P 11.5软件进行PCA、PLS‑DA和OPLS‑DA分析胚胎代谢液的代谢组学测定结果，应用OPLS‑DA模型中VIP值(VIP>1)以及t检验中的P值(P<0.05)来确定组间差异代谢物。
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